Sanger method most widely used – dideoxy DNA sequencing, method based on
DNA synthesis carried out in vitro in the presence of special, chain-terminating
dideoxyribonucleoside triphosphates
DNA polymerase is used to make partial copies
of the DNA fragment to be sequenced
DNA replication reactions performed under
conditions that ensure the new DNA strands
terminate when a give nucleotide (A,G,C,T) is
reached – reactions ultimately produce a
collection of different DNA copies that
terminate at every position in the original
DNA, and thus differ in length by a single
nucleotide
DNA copies can be separated on the basis of
their length by gel electrophoresis, and the
nucleotide sequence of the original DNA can be determined from the order of
the DNA fragments in the gel
The Process
- The reaction is carried out in
parallel with each of the
dideoxynucleotides (ie. 4 reactions
– ddAGP, ddGTP, ddCTP and ddTTP)
- The reaction products are run in
parallel on a sequencing gel and
visualised by autoradiography –
insepection of the pattern of bands allows the complete sequence to be
reconstructed
1. To determine the complete sequence of a DNA fragment, the ds DNA
denatured, one of the ssDNA strands becomes template for sequencing
2. Four different dideoxynucleoside triphosphates used in 4 separate DNA
synthesis reactions on copies of the same ssDNA template
3. Each reaction produces a set of DNA copies that terminate at different
points in the sequence
4. Products of 4 reactions separated by electrophoresis in 4 parallel lanes of a
polyacrylamide gel
Voordelen van het kopen van samenvattingen bij Stuvia op een rij:
Verzekerd van kwaliteit door reviews
Stuvia-klanten hebben meer dan 700.000 samenvattingen beoordeeld. Zo weet je zeker dat je de beste documenten koopt!
Snel en makkelijk kopen
Je betaalt supersnel en eenmalig met iDeal, creditcard of Stuvia-tegoed voor de samenvatting. Zonder lidmaatschap.
Focus op de essentie
Samenvattingen worden geschreven voor en door anderen. Daarom zijn de samenvattingen altijd betrouwbaar en actueel. Zo kom je snel tot de kern!
Veelgestelde vragen
Wat krijg ik als ik dit document koop?
Je krijgt een PDF, die direct beschikbaar is na je aankoop. Het gekochte document is altijd, overal en oneindig toegankelijk via je profiel.
Tevredenheidsgarantie: hoe werkt dat?
Onze tevredenheidsgarantie zorgt ervoor dat je altijd een studiedocument vindt dat goed bij je past. Je vult een formulier in en onze klantenservice regelt de rest.
Van wie koop ik deze samenvatting?
Stuvia is een marktplaats, je koop dit document dus niet van ons, maar van verkoper Cheesecakeextreme. Stuvia faciliteert de betaling aan de verkoper.
Zit ik meteen vast aan een abonnement?
Nee, je koopt alleen deze samenvatting voor €4,29. Je zit daarna nergens aan vast.