RESUMEN AAPP 2 - B
Sujetos -todos de acuerdo con las regulaciones de la universidad de Columbia IACUC-:
- Amigo2-Cre; y de su misma camada, Grik4-Cre y AVPR1b-K0 cruzado con Amigo2-cre. Todos
C57B1/6J.
- Para las agresiones: BALB/cJ.
- Invitro fue probado tanto con machos como con hembras y no se observó diferencia por esta variable.
- El comportamiento solo con machos.
- Fueron seleccionados asignándoles números al azaar y realizando un test de ceguera para la condición
experimental.
Variables:
- VI: Estimulación óptica y no estimulación óptica. Tienen niveles, en este caso activación (luz azul),
inhibición (amarilla) y control (la reacción si recibe luz).
- VD: agresividad, equilibrio y control motor.
Tecnología utilizada:
Fisiología in vitro, estimulación y siología in vivo, implantación de una bra óptica crónica y optogenética.
Valorándose la intensidad de la luz, tasa de disparo, tiempo que es sometido a la varilla giratoria y que
tarda en cometer una agresión o comportamiento agresivo.
Para todas las operaciones los ratones fueron anestesiados con iso urane y analgésicos. La craneotomía
fue realizada por encima de la región objetivo y la pipeta de cristal se colocó a la profundidad idónea.
Todas las coordinadas tienen como referencia los mm del Bregma.
Fue realizada una grabación de linea base durante 10 minutos y la droga, aplicada por 15 antes de medir el
efecto de la droga por otros 10 minutos. Se utilizó el software Axograph X, el Excel y PRISM para los
análisis analíticos. Igor Pro para el análisis de datos, se probó la normalidad de los datos de cada
comportamiento para cada condición experimental. Para comparar las diferencias de luz encendida /
apagada dentro de los grupos, los datos que no cumplían con el criterio de normalidad se analizaron
mediante el rango con signo de Wilcoxon no paramétrico, mientras que los datos distribuidos normalmente
se analizaron mediante la prueba t de Student emparejada de dos colas. Finalmente, las comparaciones
entre grupos se probaron mediante la prueba t de Student no aparejada de dos colas o la prueba no
paramétrica de Wilcoxon-Mann- Whitney. El criterio de signi cación estadística se estableció en p <0,05.
Resultados:
- Los ratones en experimentos de comportamiento, tras ser habituados a una habitación oscura, se
alojaron en un ciclo luz-oscuridad de 12h. Se permitió a los agresores que se recuperaran de las cirugías
para después, emparejarlas con una hembra adulta la cual es retirada para que este permanezca en
aislamiento. Los residentes fueron evaluados primero para detectar los signos de disfunción motora y
luego analizados en el campo abierto con la carilla giratoria ya agresión (los residentes).
- Los experimentos con estimulación optogenética, la fuente de luz se conectó a un cable de bra óptica
permitiendo libertad de movimiento y este se unió al implante con un manguito de férula y se dejó que
los ratones se aclimataran. Todos los ensayos se realizaron con una iluminación roja tenue. La
coordinación sensoriomotora se evaluó con un aparato de varilla giratoria automatizado. Los ratones se
colocaron en una varilla giratoria con una rotación constante que luego iba acelerando. El tiempo de
caída se calculó desde el comienzo de la aceleración. Hubo dos ensayos consecutivos donde los
ratones se asignaron al azar para recibir estimulación óptica durante el primer o segundo ensayo. Esta
comenzó comenzó antes del inicio de la aceleración y continuó hasta que el animal cayó.
- Los ensayos de campo abierto se realizaron en un recipiente cuadrado de plástico blanco opaco.
- Los ensayos de residentes-intrusos. Los residentes se conectaron a la bra óptica y se dejó que
aclimataran. Se introdujo un intruso BALB/c en la jaula. Se detenían si un animal resultara herido por un
ataque o el residente atacaba durante varios segundos. Estos se sometieron a cinco ensayos de intruso-
residente (intruso nuevo para cada ensayo). Los residentes eran retirados si no atacaban. Se estimuló un
subconjunto que expresaban clorhodopsina en intervalos. Los ensayos de intrusos-residentes fueron
cali cados manualmente por un experimentador ciego al genotipo del ratón y las longitudes de onda de
estimulación, y anotados usando el software de código abierto BORIS. Se puntuaron los siguientes
comportamientos; autoacicalamiento por parte del residente, interacciones sociales, sonajeros de cola,
amenaza lateral, persecución del intruso por parte del residente y ataques de mordedura.
fi
fi fi fl fi fi
Sujetos -todos de acuerdo con las regulaciones de la universidad de Columbia IACUC-:
- Amigo2-Cre; y de su misma camada, Grik4-Cre y AVPR1b-K0 cruzado con Amigo2-cre. Todos
C57B1/6J.
- Para las agresiones: BALB/cJ.
- Invitro fue probado tanto con machos como con hembras y no se observó diferencia por esta variable.
- El comportamiento solo con machos.
- Fueron seleccionados asignándoles números al azaar y realizando un test de ceguera para la condición
experimental.
Variables:
- VI: Estimulación óptica y no estimulación óptica. Tienen niveles, en este caso activación (luz azul),
inhibición (amarilla) y control (la reacción si recibe luz).
- VD: agresividad, equilibrio y control motor.
Tecnología utilizada:
Fisiología in vitro, estimulación y siología in vivo, implantación de una bra óptica crónica y optogenética.
Valorándose la intensidad de la luz, tasa de disparo, tiempo que es sometido a la varilla giratoria y que
tarda en cometer una agresión o comportamiento agresivo.
Para todas las operaciones los ratones fueron anestesiados con iso urane y analgésicos. La craneotomía
fue realizada por encima de la región objetivo y la pipeta de cristal se colocó a la profundidad idónea.
Todas las coordinadas tienen como referencia los mm del Bregma.
Fue realizada una grabación de linea base durante 10 minutos y la droga, aplicada por 15 antes de medir el
efecto de la droga por otros 10 minutos. Se utilizó el software Axograph X, el Excel y PRISM para los
análisis analíticos. Igor Pro para el análisis de datos, se probó la normalidad de los datos de cada
comportamiento para cada condición experimental. Para comparar las diferencias de luz encendida /
apagada dentro de los grupos, los datos que no cumplían con el criterio de normalidad se analizaron
mediante el rango con signo de Wilcoxon no paramétrico, mientras que los datos distribuidos normalmente
se analizaron mediante la prueba t de Student emparejada de dos colas. Finalmente, las comparaciones
entre grupos se probaron mediante la prueba t de Student no aparejada de dos colas o la prueba no
paramétrica de Wilcoxon-Mann- Whitney. El criterio de signi cación estadística se estableció en p <0,05.
Resultados:
- Los ratones en experimentos de comportamiento, tras ser habituados a una habitación oscura, se
alojaron en un ciclo luz-oscuridad de 12h. Se permitió a los agresores que se recuperaran de las cirugías
para después, emparejarlas con una hembra adulta la cual es retirada para que este permanezca en
aislamiento. Los residentes fueron evaluados primero para detectar los signos de disfunción motora y
luego analizados en el campo abierto con la carilla giratoria ya agresión (los residentes).
- Los experimentos con estimulación optogenética, la fuente de luz se conectó a un cable de bra óptica
permitiendo libertad de movimiento y este se unió al implante con un manguito de férula y se dejó que
los ratones se aclimataran. Todos los ensayos se realizaron con una iluminación roja tenue. La
coordinación sensoriomotora se evaluó con un aparato de varilla giratoria automatizado. Los ratones se
colocaron en una varilla giratoria con una rotación constante que luego iba acelerando. El tiempo de
caída se calculó desde el comienzo de la aceleración. Hubo dos ensayos consecutivos donde los
ratones se asignaron al azar para recibir estimulación óptica durante el primer o segundo ensayo. Esta
comenzó comenzó antes del inicio de la aceleración y continuó hasta que el animal cayó.
- Los ensayos de campo abierto se realizaron en un recipiente cuadrado de plástico blanco opaco.
- Los ensayos de residentes-intrusos. Los residentes se conectaron a la bra óptica y se dejó que
aclimataran. Se introdujo un intruso BALB/c en la jaula. Se detenían si un animal resultara herido por un
ataque o el residente atacaba durante varios segundos. Estos se sometieron a cinco ensayos de intruso-
residente (intruso nuevo para cada ensayo). Los residentes eran retirados si no atacaban. Se estimuló un
subconjunto que expresaban clorhodopsina en intervalos. Los ensayos de intrusos-residentes fueron
cali cados manualmente por un experimentador ciego al genotipo del ratón y las longitudes de onda de
estimulación, y anotados usando el software de código abierto BORIS. Se puntuaron los siguientes
comportamientos; autoacicalamiento por parte del residente, interacciones sociales, sonajeros de cola,
amenaza lateral, persecución del intruso por parte del residente y ataques de mordedura.
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