Geïntegreerd practicum 1 (biochemie): samenvatting

GEÏNTEGREERD PRACTICUM
BIOCHEMIE:
SAMENVATTING
Academiejaar 2019-2020




Bronnen:
Samenvatting gemaakt a.d.h.v. de uitleg gegeven tijdens de inleidingsles en het practicum door Prof. Eva Geuens.
Afbeeldingen afkomstig uit de PowerPoint van de inleidingsles van Prof. Eva Geuens.

,Inhoudsopgave
Algemeen ............................................................................................................................................................................................ 2
Vraagstukken .................................................................................................................................................................................. 2
Berekeningen hoe een oplossing te maken .................................................................................................................................... 2
Berekenen van verdunningsreeksen ............................................................................................................................................... 3
Principe van ijklijn en kalibratie ermee kunnen toepassen ............................................................................................................ 3
Experiment 1 ....................................................................................................................................................................................... 4
Homogenisatie via Potter homogenisatie....................................................................................................................................... 4
Differentiële centrifugatie .............................................................................................................................................................. 4
Principe van SDH assay kennen ...................................................................................................................................................... 4
Beschrijving experiment 1............................................................................................................................................................... 5
Experiment 2 ....................................................................................................................................................................................... 7
Principe zoutprecipitatie en dialyse kennen ................................................................................................................................... 7
Principe eiwitconcentratiebepaling kennen en verwerking kunnen toepassen ............................................................................. 7
Principe van ionenuitwisselingschromatografie + kunnen toepassen (keuze buffer, keuze matrix).............................................. 7
Principe SDS-PAGE kennen + berekenen van stalen ....................................................................................................................... 8
Principe Western blotting kennen (positieve controle/negatieve controle/ primair antilichaam/secundair antilichaam) ........... 9
Natieve LDH iso-enzym scheiding ................................................................................................................................................... 9
Beschrijving experiment 2............................................................................................................................................................. 10
Practicum 4 ....................................................................................................................................................................................... 13
Principe fluorimetrie kennen en dataverwerking kunnen toepassen........................................................................................... 13
Beschrijving experiment 4............................................................................................................................................................. 13
Practicum 5 ....................................................................................................................................................................................... 14
Principe enzymkinetiek kennen en dataverwerking kunnen toepassen ...................................................................................... 14
Beschrijving experiment 5............................................................................................................................................................. 16
Stoffen gebruikt in practicum ........................................................................................................................................................... 17
Experiment 1 ................................................................................................................................................................................. 17
Experiment 2 ................................................................................................................................................................................. 17
Experiment 4 ................................................................................................................................................................................. 18
Experiment 5 ................................................................................................................................................................................. 18




1

, Algemeen
Vraagstukken
 zie seminaries:
- S1 = concentratiebepalingen
- S2 = optische technieken
- S3 = elektrochemie (deel 1)
- S4 = elektrochemie (deel 2)

Berekeningen hoe een oplossing te maken
Formules:
𝑛
- 𝐶=
𝑉
𝑚
- 𝑛=
𝑀𝑀
- 𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2

Oplossing maken:
𝒏 𝒎
1) bereken hoeveel gram  Formules: 𝑪 = met 𝒏 =
𝑽 𝑴𝑴
vaste stof je nodig hebt
2) weeg juiste gewicht af  Plaats object (beker/schuitje) op balans, druk op TARRE, weeg juiste product af

Keuze balans/object:
 2 typen balansen
o Gewone balans  op 2 cijfers na komma (voor alles > 1g)
o Analytische balans  op 4 cijfers na komma (voor alles < 1g)
 Afwegen in:
o Beker  oplossing met 1 component
o Weegschuitje  oplossing met meerdere componenten

Opmerking
 Kies juiste beker (zo dicht mogelijk bij eindvolume, maar alles moet er wel in gaan)
 Streepjes op de beker zijn onnauwkeurig! (niet exact)

3) oplossing maken Stap 1: doe 3/4e van eindvolume in beker
 Vb.: oplossing van 200 ml  voeg al 150 ml toe
 Waarom?
o Sommige oplossingen moeten op pH gemaakt worden (dus eerst een
zuur/base toevoegen)
o Stel: ineens eindvolume  molariteit klopt niet meer
o MAAR: water toevoegen  pH verandert niet

Stap 2: oplossen
 Doe magnetisch roersteentje in beker
 Zet beker op roerplaat
 Wacht tot alles is opgelost

Stap 3: maak correct eindvolume
 Giet de oplossing over in object met juiste eindvolume (200 ml):
o In een kolf  is het meest nauwkeurig
o In maatcilinder  bij kleurstoffen of schuimende oplossingen
 Roersteentje mag niet in kolf (houdt ander roersteentje tegen bodem)
 Vul aan met gedestilleerd water

Stap 4: homogeniseren
 Sluit kolf af m.b.v. een polymeer parafilm
o Over opening trekken
o Ong. 3-4 x erover doen
 Schudden & zo verder doen oplossen




2