HOOFDSTUK 3 : DIAGNOSTIEK BINNEN DE
HEMATOLOGIE
1. Automatische telling RBC, WBC en plaatjes
CELTELLER voor uitvoeren van ‘complete blood count’ (CBC)
- RBC, WBC, plaatjes, Hb, MCV, MCH, MCHC, reticulocyten
Impedantiemeting
Optische meting/ fluorescentie meting
Automatische differentiatie
2. Microscopisch onderzoek
Afwijkende stalen : nood microscopisch onderzoek
Voordeel : snel & goedkoop, digitale microscopie beschikbaar naast de klassieke microscopie
Nadeel : vraagt expertise, lage gevoeligheid (analyse van slechts 100-500 cellen) , verdere
typering noodzakelijk
, 3. Immuunfenotypering – flowcytometrie
3.1 Hydrodynamische focussing
Verkrijgen van de juiste oriëntatie van de cel tov het meetapparaat
Gebruik maken van een sheath flow
Sheath flow = vloeistofstroom = buffer die de vloeistofstroom met cellen volledig
omringt
Sheath flow heeft hogere snelheid : vloeistofstroom wordt gefocust
Cellen gaan individueel in flowkamer (flow cell)
Flow cell
- Aanstralen van individuele cellen (20.000/seconde) door 1 of meerdere lasers (standaard
in routine 3 lasers 12 fluorochromen)
3.2 Meting van forward scatter (FSC) en side scatter (SSC)
FSC correleert met grootte en SSC met interne structuur en granulatie
Differentiatie van celtypes in een heterogene celpopulatie (bloed/beenmerg/suspensie van
biopt) mogelijk = identiek aan werking celteller
3.3 Fluorescentie
Detectie van fluorescentie na voorafgaandelijke labeling van cellen met antilichamen
gekoppeld aan fluorochromen (anti CD19 antistof met fluorochroom , anti CD3 antistof met
fluorochroom)
Elk fluorochroom zorgt voor licht emissie bij een welbepaalde golflengte na excitatie door
lasers gebruik van golflengte specifieke fluorescentie kanalen
Fluorochromen – excitatie en emissie (Stokes shift)
Filters en fluorescente detectoren
HEMATOLOGIE
1. Automatische telling RBC, WBC en plaatjes
CELTELLER voor uitvoeren van ‘complete blood count’ (CBC)
- RBC, WBC, plaatjes, Hb, MCV, MCH, MCHC, reticulocyten
Impedantiemeting
Optische meting/ fluorescentie meting
Automatische differentiatie
2. Microscopisch onderzoek
Afwijkende stalen : nood microscopisch onderzoek
Voordeel : snel & goedkoop, digitale microscopie beschikbaar naast de klassieke microscopie
Nadeel : vraagt expertise, lage gevoeligheid (analyse van slechts 100-500 cellen) , verdere
typering noodzakelijk
, 3. Immuunfenotypering – flowcytometrie
3.1 Hydrodynamische focussing
Verkrijgen van de juiste oriëntatie van de cel tov het meetapparaat
Gebruik maken van een sheath flow
Sheath flow = vloeistofstroom = buffer die de vloeistofstroom met cellen volledig
omringt
Sheath flow heeft hogere snelheid : vloeistofstroom wordt gefocust
Cellen gaan individueel in flowkamer (flow cell)
Flow cell
- Aanstralen van individuele cellen (20.000/seconde) door 1 of meerdere lasers (standaard
in routine 3 lasers 12 fluorochromen)
3.2 Meting van forward scatter (FSC) en side scatter (SSC)
FSC correleert met grootte en SSC met interne structuur en granulatie
Differentiatie van celtypes in een heterogene celpopulatie (bloed/beenmerg/suspensie van
biopt) mogelijk = identiek aan werking celteller
3.3 Fluorescentie
Detectie van fluorescentie na voorafgaandelijke labeling van cellen met antilichamen
gekoppeld aan fluorochromen (anti CD19 antistof met fluorochroom , anti CD3 antistof met
fluorochroom)
Elk fluorochroom zorgt voor licht emissie bij een welbepaalde golflengte na excitatie door
lasers gebruik van golflengte specifieke fluorescentie kanalen
Fluorochromen – excitatie en emissie (Stokes shift)
Filters en fluorescente detectoren
