PLASMA 3: Bepaling van fenylalanine in plasma
STAP 1: Het maken van de spike oplossingen (= verdunningen
fenylalanine)
Fenylalanine standaard (1mg/mL) klein bruin flesje
Maak gebruik van glazen pipetten
Klein volume in groot volume pipetteren
Goed vortexen!! (Homogeniseren)
Ronde proefbuizen gebruiken, geen centrifugeer proefbuizen
(contaminant aanwezig)
STAP 2: De standaarden
Controleer de volumes van de automatische pipettor bij elke stap!
Pipetteren gebeurt in 1 stap. (bv. pipetteer 400µl in 1 keer en niet 4X
100µl)
Pipetteer eerst Blanco BSA in elke proefbuis.
Bij het spiken van de spike oplossing, de pipettip net boven de BSA-
oplossing houden bij het uitduwen, en niet bovenaan de proefbuis.
Telkens een nieuwe tip gebruiken voor elke standaard.
Goed mengen, geen parafilm gebruiken en niet vortexen (schuimvorming)
Homogeniseren!
STAP 3: Proteïne precipitatie
Waarom proteïne precipitatie: staal opzuivering, eiwitten laten neerslaan
Respecteer de volgorde van het protocol!
Proefbuizen goed labelen.
Goed vortexen voor de centrifugatie stap
Centrifuge in evenwicht opvullen
De centrifuge enkel openen als het oranje lichtje brand!
Indien supernatans niet helder is nog eens centrifugeren.
STAP 1: Het maken van de spike oplossingen (= verdunningen
fenylalanine)
Fenylalanine standaard (1mg/mL) klein bruin flesje
Maak gebruik van glazen pipetten
Klein volume in groot volume pipetteren
Goed vortexen!! (Homogeniseren)
Ronde proefbuizen gebruiken, geen centrifugeer proefbuizen
(contaminant aanwezig)
STAP 2: De standaarden
Controleer de volumes van de automatische pipettor bij elke stap!
Pipetteren gebeurt in 1 stap. (bv. pipetteer 400µl in 1 keer en niet 4X
100µl)
Pipetteer eerst Blanco BSA in elke proefbuis.
Bij het spiken van de spike oplossing, de pipettip net boven de BSA-
oplossing houden bij het uitduwen, en niet bovenaan de proefbuis.
Telkens een nieuwe tip gebruiken voor elke standaard.
Goed mengen, geen parafilm gebruiken en niet vortexen (schuimvorming)
Homogeniseren!
STAP 3: Proteïne precipitatie
Waarom proteïne precipitatie: staal opzuivering, eiwitten laten neerslaan
Respecteer de volgorde van het protocol!
Proefbuizen goed labelen.
Goed vortexen voor de centrifugatie stap
Centrifuge in evenwicht opvullen
De centrifuge enkel openen als het oranje lichtje brand!
Indien supernatans niet helder is nog eens centrifugeren.
