Meetrapporten B05MBE
Naam:
Studentnummer:
Klas:
Docent:
Module: B05MBE
Datum: 31-10-2023
, MBE Meetrapport Transformatie
Doel Transformatie
Het doel van kloneren is om een plasmide in een bacterie te brengen. Door te transformeren, kunnen
de bacteriën vaak het bewerkte plasmide repliceren. Dit DNA kun je later isoleren en gebruiken voor
bijvoorbeeld transfectie in eukaryote cellen. Het doel van kloneren in dit experiment is om
competente E. coli DH5α cellen het plasmide op te laten nemen door middel van een heat shock.
Door deze stap te doen, kunnen de bacteriën vaak het bewerkte plasmide repliceren. Door later in
het kloneringsproces het plasmide uit de bacteriën te isoleren, heb je veel kopieën van het plasmide
die je kunt gebruiken voor de transfectie in Dictyostelium discoideum.
Verwachting Transformatie
Tabel 1: Verwachtingen van de transformatie van competente E. coli DH5a
Plaa Wat is er uitgeplaat? Voedingsbode Verwachting (kolonies/aantal)
t (benoem alle componenten per m
plaat)
1 Competente E. coli DH5α LB-agar + Groei, redelijke hoeveelheid
getransformeerd met ampicilline kolonies
pDM317+H2B
2 Competente E. coli DH5α LB-agar + Geen groei
getransformeerd met geknipt ampicilline
pDM317
3 Competente E. coli DH5α LB-agar + Groei, redelijke hoeveelheid
getransformeerd met pDM317 ampicilline kolonies
(Positieve controle, laat zien dat
bacterie plasmide op kan nemen)
4 Competente E. coli DH5α LB-agar + Geen groei
ampicilline (Controle, laat zien dat bacterie
niet van te voren al ampicilline-
resistent was)
5 Competente E. coli DH5α LB-agar zonder Groei, hele plaat vol
ampicilline (Controle, laat zien dat de cellen
niet van te voren al dood zijn)
Je verwacht groei op plaat 1, mits de bacterie het plasmide met het insert heeft opgenomen. Dit
komt doordat het plasmide een ampicillineresistentie gen bevat. Hierdoor gaan alle bacteriën die het
plasmide niet op hebben genomen dood (door de ampicilline) en overleven alleen de bacteriën die
het plasmide hebben opgenomen. Op plaat 2 verwacht je geen groei, omdat het geknipte plasmide
een lineair stuk DNA is. Doordat het geknipte plasmide behandeld is met CIP, kan het niet zichzelf
ligeren. Bacteriën kunnen dit stuk DNA niet gebruiken. Op plaat 3 verwacht je groei. Het plasmide dat
gebruikt is voor deze transformatie bevat niet het insert, maar omdat het plasmide alsnog het
ampicillineresistentie gen bevat zullen de bacteriën alsnog groeien op de plaat (mits de bacterie het
plasmide heeft opgenomen). Deze plaat geldt als controle, om te controleren of de bacteriën een
plasmide op kunnen nemen. Op plaat 4 verwacht je geen groei. Dit komt doordat de cellen geen gen
voor ampicillineresistentie hebben. Deze plaat geldt als controle. Als je groei vindt op deze plaat, kan
het betekenen dat de bacteriën al van tevoren ampicillineresistent waren. Op plaat 5 verwacht je
veel groei. Deze bacteriën worden uitgeplaat op een plaat zonder ampicilline en zullen dus ook
zonder opgenomen plasmide moeten kunnen groeien. Ook deze plaat geldt als controle, als je op
deze plaat geen groei vindt kan het betekenen dat de competente cellen vóór het uitplaten al dood
waren.
Naam:
Studentnummer:
Klas:
Docent:
Module: B05MBE
Datum: 31-10-2023
, MBE Meetrapport Transformatie
Doel Transformatie
Het doel van kloneren is om een plasmide in een bacterie te brengen. Door te transformeren, kunnen
de bacteriën vaak het bewerkte plasmide repliceren. Dit DNA kun je later isoleren en gebruiken voor
bijvoorbeeld transfectie in eukaryote cellen. Het doel van kloneren in dit experiment is om
competente E. coli DH5α cellen het plasmide op te laten nemen door middel van een heat shock.
Door deze stap te doen, kunnen de bacteriën vaak het bewerkte plasmide repliceren. Door later in
het kloneringsproces het plasmide uit de bacteriën te isoleren, heb je veel kopieën van het plasmide
die je kunt gebruiken voor de transfectie in Dictyostelium discoideum.
Verwachting Transformatie
Tabel 1: Verwachtingen van de transformatie van competente E. coli DH5a
Plaa Wat is er uitgeplaat? Voedingsbode Verwachting (kolonies/aantal)
t (benoem alle componenten per m
plaat)
1 Competente E. coli DH5α LB-agar + Groei, redelijke hoeveelheid
getransformeerd met ampicilline kolonies
pDM317+H2B
2 Competente E. coli DH5α LB-agar + Geen groei
getransformeerd met geknipt ampicilline
pDM317
3 Competente E. coli DH5α LB-agar + Groei, redelijke hoeveelheid
getransformeerd met pDM317 ampicilline kolonies
(Positieve controle, laat zien dat
bacterie plasmide op kan nemen)
4 Competente E. coli DH5α LB-agar + Geen groei
ampicilline (Controle, laat zien dat bacterie
niet van te voren al ampicilline-
resistent was)
5 Competente E. coli DH5α LB-agar zonder Groei, hele plaat vol
ampicilline (Controle, laat zien dat de cellen
niet van te voren al dood zijn)
Je verwacht groei op plaat 1, mits de bacterie het plasmide met het insert heeft opgenomen. Dit
komt doordat het plasmide een ampicillineresistentie gen bevat. Hierdoor gaan alle bacteriën die het
plasmide niet op hebben genomen dood (door de ampicilline) en overleven alleen de bacteriën die
het plasmide hebben opgenomen. Op plaat 2 verwacht je geen groei, omdat het geknipte plasmide
een lineair stuk DNA is. Doordat het geknipte plasmide behandeld is met CIP, kan het niet zichzelf
ligeren. Bacteriën kunnen dit stuk DNA niet gebruiken. Op plaat 3 verwacht je groei. Het plasmide dat
gebruikt is voor deze transformatie bevat niet het insert, maar omdat het plasmide alsnog het
ampicillineresistentie gen bevat zullen de bacteriën alsnog groeien op de plaat (mits de bacterie het
plasmide heeft opgenomen). Deze plaat geldt als controle, om te controleren of de bacteriën een
plasmide op kunnen nemen. Op plaat 4 verwacht je geen groei. Dit komt doordat de cellen geen gen
voor ampicillineresistentie hebben. Deze plaat geldt als controle. Als je groei vindt op deze plaat, kan
het betekenen dat de bacteriën al van tevoren ampicillineresistent waren. Op plaat 5 verwacht je
veel groei. Deze bacteriën worden uitgeplaat op een plaat zonder ampicilline en zullen dus ook
zonder opgenomen plasmide moeten kunnen groeien. Ook deze plaat geldt als controle, als je op
deze plaat geen groei vindt kan het betekenen dat de competente cellen vóór het uitplaten al dood
waren.
