Génie Enzymatique
TD 4
Problème
1. Le profil chromatographique d'afinité sur Pepstatine Aagarose de la fraction ayant
une activité coagulante, obtenue par chromatographie échangeuse d'ions et
concentrée, est illustrépar la figure 1, avec des variations d'activitéenzymatique et de
taux de protéines.
Activitéenzymatique (U.)
Taux de protéines (ug/ml)
(U.)
enzymatique
Activité
1400 45
40
1200
35
1000 30
800 25
20
600
15
400 10
5
200
-5
-200 O 2 4 6 -10
Fractions
Figure 1:Allure de l'élution des protéines sur colonne de chromato graphie d'affinité
Donnez le principe d'une chromatographie d'affinité.
Interprétez la courbe d'élution.
2. L'enzyme purifiée est visualisée sur gel d'électrophorèse en conditions dénaturantes
(SDSPAGE)(Figure 3).
173*
130**
Figure 3:SDS-PAGE de la protéase d'A. niger : a: marqueur de PM b: fraction issue de la
chromatographie d'exclusion moléculairte ; d- Fraction issue de chromato d'affinité.
Déterminez le PM des sous unités de l'enzyme.
1
, 3. Le suivi de 1''effet du pH sur l'activitéprotéasique de l'enzyme purifiée de A. niger a
montréque la protéine est active àdifférents pH 3,5 5,0dans du tampon Tris /HCI,
mais son maximum d'activité àété observé àpH 5,5 et à45 °C, au-delà de ce pH
l'activité de l'enzyme diminue de façon considérable. .Les résultats suivants sont
obtenus:
40°C
45°C
50°C
400
6 200
60 120 180
240
Temps300
(min. 420 480
Figure 2: Stabilité de l'activitéenzymatique de A. niger à différentes températures.
Interprétez le graphe.
2
TD 4
Problème
1. Le profil chromatographique d'afinité sur Pepstatine Aagarose de la fraction ayant
une activité coagulante, obtenue par chromatographie échangeuse d'ions et
concentrée, est illustrépar la figure 1, avec des variations d'activitéenzymatique et de
taux de protéines.
Activitéenzymatique (U.)
Taux de protéines (ug/ml)
(U.)
enzymatique
Activité
1400 45
40
1200
35
1000 30
800 25
20
600
15
400 10
5
200
-5
-200 O 2 4 6 -10
Fractions
Figure 1:Allure de l'élution des protéines sur colonne de chromato graphie d'affinité
Donnez le principe d'une chromatographie d'affinité.
Interprétez la courbe d'élution.
2. L'enzyme purifiée est visualisée sur gel d'électrophorèse en conditions dénaturantes
(SDSPAGE)(Figure 3).
173*
130**
Figure 3:SDS-PAGE de la protéase d'A. niger : a: marqueur de PM b: fraction issue de la
chromatographie d'exclusion moléculairte ; d- Fraction issue de chromato d'affinité.
Déterminez le PM des sous unités de l'enzyme.
1
, 3. Le suivi de 1''effet du pH sur l'activitéprotéasique de l'enzyme purifiée de A. niger a
montréque la protéine est active àdifférents pH 3,5 5,0dans du tampon Tris /HCI,
mais son maximum d'activité àété observé àpH 5,5 et à45 °C, au-delà de ce pH
l'activité de l'enzyme diminue de façon considérable. .Les résultats suivants sont
obtenus:
40°C
45°C
50°C
400
6 200
60 120 180
240
Temps300
(min. 420 480
Figure 2: Stabilité de l'activitéenzymatique de A. niger à différentes températures.
Interprétez le graphe.
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