H1: methoden & technieken voor microscopie
1) Staalafname
a) Biopsie
Endoscopisch
CNB
Punch
Excisie / incisie
b) Afzonderlijke cellen
FNAC
Vocht
Cervixbrush
Bloed- / beenmerguitstrijkje
2) Voorbereiding
a) Fixatie
Immersie / perfusie in formaldehyde / alcohol
- Stoppen van enzymfuncties
- 1:2
Paraffinecoupes (duurt lang)
Dehydratatie, klaring van alcohol, paraffinering, snijden met
microtoom, deparaffineren
Eventueel IHC
b) Invriezen & snijden met cryostaat
Snel! → preoperatief
Enzymactiviteit bewaard
Mindere kwaliteit
3) Kleuring
a) H&E
- Cytoplasmatische eiwitten & collageen = acidofiel → binden aan zure
eosine → roos
- DNA, RNA, koolhydraten & RER = basofiel → binden aan basische
haematoxyline → paars
b) PAS
Schiff reagens (basisch fuchsine) + aldehyde groepen (KH) → magenta
Glycogeen, mucus, BM, brush borders, reticuline vezels
c) IHC
Antistoffen op zoek naar antigenen (eiwitten) → bruine kleur
Direct / indirect
Monoklonaal / polyklonaal
d) FISH
DNA/RNA seq
e) CISH
Combinatie IHC + ISH
, H3: celinteracties
Metastasering !
Afbraak door MMPs
CEL - ECM
Hemidesmosomen
Cytoskelet → integrines → fibronectine → basale membraan
Basale membraan (basale lamina / lamina externa + reticulaire laag): collageen
IV / elastisch + glycoproteïnen
CEL - CEL
1. Tight junctions (zonula occludens)
Occludines & claudines
Afsluiting
2. Tight junctions (zonula adhaerens)
Cadherines → cateninen → microfilamenten (actine)
Aanhechting
3. Desmosomen (macula adhaerens)
Cadherines → intermediaire filamenten (cytoskelet)
Aanhechting
4. Gap junctions (Nexus)
6 connexinen → connexon
Elektrische en metabolische communicatie
1) Staalafname
a) Biopsie
Endoscopisch
CNB
Punch
Excisie / incisie
b) Afzonderlijke cellen
FNAC
Vocht
Cervixbrush
Bloed- / beenmerguitstrijkje
2) Voorbereiding
a) Fixatie
Immersie / perfusie in formaldehyde / alcohol
- Stoppen van enzymfuncties
- 1:2
Paraffinecoupes (duurt lang)
Dehydratatie, klaring van alcohol, paraffinering, snijden met
microtoom, deparaffineren
Eventueel IHC
b) Invriezen & snijden met cryostaat
Snel! → preoperatief
Enzymactiviteit bewaard
Mindere kwaliteit
3) Kleuring
a) H&E
- Cytoplasmatische eiwitten & collageen = acidofiel → binden aan zure
eosine → roos
- DNA, RNA, koolhydraten & RER = basofiel → binden aan basische
haematoxyline → paars
b) PAS
Schiff reagens (basisch fuchsine) + aldehyde groepen (KH) → magenta
Glycogeen, mucus, BM, brush borders, reticuline vezels
c) IHC
Antistoffen op zoek naar antigenen (eiwitten) → bruine kleur
Direct / indirect
Monoklonaal / polyklonaal
d) FISH
DNA/RNA seq
e) CISH
Combinatie IHC + ISH
, H3: celinteracties
Metastasering !
Afbraak door MMPs
CEL - ECM
Hemidesmosomen
Cytoskelet → integrines → fibronectine → basale membraan
Basale membraan (basale lamina / lamina externa + reticulaire laag): collageen
IV / elastisch + glycoproteïnen
CEL - CEL
1. Tight junctions (zonula occludens)
Occludines & claudines
Afsluiting
2. Tight junctions (zonula adhaerens)
Cadherines → cateninen → microfilamenten (actine)
Aanhechting
3. Desmosomen (macula adhaerens)
Cadherines → intermediaire filamenten (cytoskelet)
Aanhechting
4. Gap junctions (Nexus)
6 connexinen → connexon
Elektrische en metabolische communicatie
