Naam: Yilska Smet
Klas: 2FBTa
Docent: Sarah van Vooren
Datum : 25/09/2020
Labo farmaceutische analyse II : Inleidende proef HPLC
a. Wat is reversed phase chromatografie? Wat is het verschil met normal phase
chromatografie?
Reversed phase chromatografie: de stationaire fase heeft een apolaire of zwak polaire R-
groep. De retentie op de kolom wordt veroorzaakt door apolaire interacties. Het wordt
voornamelijk gebruikt om zwak polaire of apolaire componenten te scheiden. Hierbij wordt
gebruikt gemaakt van een vrij polair solvent. ( = mobiele fase)
Normal phase chromatografie: Polaire stationaire fase (silica) en een minder polaire
mobiele fase. Polaire interacties. Het eluens moet minder polair zijn dan de stationaire fase.
(scheiden polaire componenten)
b. Welke componenten kan je bepalen met een reversed phase chromatografie?
De zwak polaire of apolaire componenten. (eerst elueren de minst apolaire componenten en
daarna de meest apolaire componenten)
c. Wat is de LogP-waarde van hydrocortisone en hydrocortison21-acetaat? In welke volgorde
elueren deze stoffen bij een reversed phase chromatografie?
Hydrocortisone: 1,15
Hydrocortisone 21-acetaat: 2,20
d. Geef de structuurformule van beide componenten.
Hydrocortisone: C21H30O5
Hydrocortisone 21-acetaat: C23H32O6
, e. Wat zijn de verschillende onderdelen van een HPLC-UV toestel ?
- Solventreservoir
- Ontgasser
- Pomp
- Injector
- Kolom
- Detector (UV detector)
- Recorder of pc
f. Wat is de functie van de onderdelen?
Solventreservoir: deze bevat de mobiele fase die frequent bestaat uit water of waterige
bufferoplossing, mengsels van water en organische oplosmiddelen of mengsels van
organische oplosmiddelen
Ontgasser: moet de vorming van gasbellen voorkomen in de injector, kolom of de detector.
Pomp: overwinnen van de grote weerstand tegen vloeistofstroming in de scheidingskolom.
Injector: het te scheiden mengsel wordt gewoonlijk op de kolom geïntroduceerd met behulp
van een zesweg-injectiekraan. De injectiekraan moet bestemd zijn tegen hoge drukken.
Kolom: het oplosmiddel dat vanuit de kolom komt en de gescheiden componenten van het
mengsel bevat gaat naar de detector.
Detector (UV detector) : hier wordt ultraviolet licht gestraald door de componenten. Dit licht
is ingesteld volgens een bepaalde golflengte en wordt geabsorbeerd door al de gescheiden
componenten. De componenten die UV licht kan absorberen, komt uit de kolom.
PC: Hier kunnen we de resultaten aflezen
g. Waarom worden de mobiele fases vooraf in het ultrasoon bad geplaatst?
Het is de bedoeling dat de mobile fase zo weinig mogelijk lucht bevat. Zo worden de
eventuele luchtbellen die ontstaan zijn door het mengen van organische solventen, ontgast in
het ultrasoonbad. Het is ook belangrijk dat de mobiele fase geen kleine deeltjes meer bevatten
deze kunnen de kolom verstoppen
h. Hoe wordt de lineariteit bepaald van een kalibratielijn tijdens de validatie?
Door 3 maal standaard 1, éénmaal standaard 2, tweemaal standaard 3, éénmaal standaard 4 en
driemaal standaard 5 te berekenen. Zo bekomt men 10 meetpunten waarmee men via lineaire
regressie de kengetallen van de kalibratielijn kan berekenen.
Klas: 2FBTa
Docent: Sarah van Vooren
Datum : 25/09/2020
Labo farmaceutische analyse II : Inleidende proef HPLC
a. Wat is reversed phase chromatografie? Wat is het verschil met normal phase
chromatografie?
Reversed phase chromatografie: de stationaire fase heeft een apolaire of zwak polaire R-
groep. De retentie op de kolom wordt veroorzaakt door apolaire interacties. Het wordt
voornamelijk gebruikt om zwak polaire of apolaire componenten te scheiden. Hierbij wordt
gebruikt gemaakt van een vrij polair solvent. ( = mobiele fase)
Normal phase chromatografie: Polaire stationaire fase (silica) en een minder polaire
mobiele fase. Polaire interacties. Het eluens moet minder polair zijn dan de stationaire fase.
(scheiden polaire componenten)
b. Welke componenten kan je bepalen met een reversed phase chromatografie?
De zwak polaire of apolaire componenten. (eerst elueren de minst apolaire componenten en
daarna de meest apolaire componenten)
c. Wat is de LogP-waarde van hydrocortisone en hydrocortison21-acetaat? In welke volgorde
elueren deze stoffen bij een reversed phase chromatografie?
Hydrocortisone: 1,15
Hydrocortisone 21-acetaat: 2,20
d. Geef de structuurformule van beide componenten.
Hydrocortisone: C21H30O5
Hydrocortisone 21-acetaat: C23H32O6
, e. Wat zijn de verschillende onderdelen van een HPLC-UV toestel ?
- Solventreservoir
- Ontgasser
- Pomp
- Injector
- Kolom
- Detector (UV detector)
- Recorder of pc
f. Wat is de functie van de onderdelen?
Solventreservoir: deze bevat de mobiele fase die frequent bestaat uit water of waterige
bufferoplossing, mengsels van water en organische oplosmiddelen of mengsels van
organische oplosmiddelen
Ontgasser: moet de vorming van gasbellen voorkomen in de injector, kolom of de detector.
Pomp: overwinnen van de grote weerstand tegen vloeistofstroming in de scheidingskolom.
Injector: het te scheiden mengsel wordt gewoonlijk op de kolom geïntroduceerd met behulp
van een zesweg-injectiekraan. De injectiekraan moet bestemd zijn tegen hoge drukken.
Kolom: het oplosmiddel dat vanuit de kolom komt en de gescheiden componenten van het
mengsel bevat gaat naar de detector.
Detector (UV detector) : hier wordt ultraviolet licht gestraald door de componenten. Dit licht
is ingesteld volgens een bepaalde golflengte en wordt geabsorbeerd door al de gescheiden
componenten. De componenten die UV licht kan absorberen, komt uit de kolom.
PC: Hier kunnen we de resultaten aflezen
g. Waarom worden de mobiele fases vooraf in het ultrasoon bad geplaatst?
Het is de bedoeling dat de mobile fase zo weinig mogelijk lucht bevat. Zo worden de
eventuele luchtbellen die ontstaan zijn door het mengen van organische solventen, ontgast in
het ultrasoonbad. Het is ook belangrijk dat de mobiele fase geen kleine deeltjes meer bevatten
deze kunnen de kolom verstoppen
h. Hoe wordt de lineariteit bepaald van een kalibratielijn tijdens de validatie?
Door 3 maal standaard 1, éénmaal standaard 2, tweemaal standaard 3, éénmaal standaard 4 en
driemaal standaard 5 te berekenen. Zo bekomt men 10 meetpunten waarmee men via lineaire
regressie de kengetallen van de kalibratielijn kan berekenen.
