INTRODUCCION
Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a
medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar
distintos microorganismos presentes.
Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la
actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en
un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no.
Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de múltiples medios, los
cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo
en estudio.
De la amplia variedad de pruebas bioquímicas, nosotros en laboratorio
utilizaremos 10, aplicados a 5 especies de microorganismos.
Además estudiaremos los resultados que estos test arrojan, comparando
resultados experimentales entre los distintos grupos de trabajo de nuestro
laboratorio.
Objetivos dentro del laboratorio.
Realizar las pruebas adecuadamente y poder identificar -aplicando éste
método- distintos microorganismos.
Debemos conocer cuál de los test que componen las pruebas bioquímicas
es o son el (los) adecuado(s) de acuerdo a la circunstancia que
necesitemos estudiar.
Entender los principios bioquímicos de las pruebas.
Ser capaces de interpretar adecuadamente los resultados entregados por
las pruebas bioquímicas
Conocer el uso de las pruebas bioquímicas para la identificación de
microorganismos
Identificar errores de procedimiento en el laboratorio al realizar los
experimentos y poder reconocer en que partes del procedimiento se
cometió el o los errores, para así, mediante el desarrollo experimental
conocer mas profundamente las pruebas bioquímicas.
,PRUEBAS RAPIDAS:
Prueba de la Oxidasa
El objetivo de la prueba “Oxidasa” es buscar la presencia de la
enzima Citocromo C oxidasa.
Se trata de un enzima que oxida el citocromo C de la cadena transportadora
de e-. Este se detecta utilizando el tetra para fenilendiamina: el reactivo de
oxidasa contiene este compuesto que va a ser oxidado por la citocromo C
oxidasa. En estado reducido es incolora, pero cuando se oxida vira a
púrpura.
Procedimiento:
Con un pequeño papel de filtro añadimos reactivo de Kovacs, lo
impregnamos y a partir del tubo con la bacteria problema tomamos un poco
con el asa de platino y ponemos en el papel. Tras unos 30 segundos,
observamos si ha ocurrido algún cambio.
Las bacterias que dan positivo a esta prueba tienen generalmente un ciclo
respiratorio oxidativo.
Se considera positva esta prueba cuando toma un color púrpura la muestra.
Resultados:
(+) Pseudomonas aeruginosa
( - ) Escherichia coli
Prueba de la Catalasa
El Objetivo es buscar la presencia de la enzima catalasa
El peróxido de hidrógeno se produce al utilizar la bacteria el azúcar por vía
oxidativa. Al ser éste un compuesto muy oxidante las bacterias la eliminan
mediante la producción de la enzima catalasa (H2O2 -> H2O + ½ O2).
Procedimiento:
Agregamos aproximadamente 5 ml. de peróxido de hidrógeno al 3% a un
tubo de ensayo previamente esterilizado a continuación tomamos una
muestra de la cepa del microorganismo a estudiar y la introducimos por el
tubo de ensayo, la muestra solamente debe acercarse a la muestra de la
solución liquida de peróxido de hidrogeno y debemos observar la reacción
, de esta.
La prueba se considera como positiva si observamos burbujas de oxígeno.
Resultados:
(+) Staphylococcus aureus
( - ) Streptococcus spp.
Prueba de la Coagulasa
La coagulasa es un enzima capaz de desnaturalizar la bibrina del plasma. El
objetivo es buscar en factor de aglutinación de los microorganismos cuando
estos se mezclan con el plasma. Esta prueba se utiliza para diferenciar
microorganismos del genero Staphylococcus.
Procedimiento:
Preparamos una mezcla de 0,1 ml. de CCC (caldo cerebro corazón) y 0,3
ml. de plasma de conejo en un tubo de ensayo previamente esterilizado. La
muestra ya contiene cepas de St. Aureus. Tapamos el tubo de ensayo con
algodón hidrofílico y lo llevamos a baño María a 37° C durante una hora,
observando la muestra cada 15 minutos. Al completa la hora, sacamos las
muestras y observamos sus resultados.
Resultados:
Estratificaremos los resultados en 4 distintos niveles:
1: pequeños coágulos no organizados
2: pequeños coágulos organizados
3: gran coágulo organizado
4: todo el contenido aparece coagulado y se mantiene cuando invierte el
tubo.
Se consideran positivos los niveles 3 y 4.
(+) Staphylococcus aureus
( - ) Staphylococcus epidermis.
PBAS BIOQUIMICAS
Prueba MIO (Motility-Indole-Ornitine ó Motilidad-Indol-Ornitina)
Esta prueba bioquímica permite identificar bacterias de acuerdo a su
motilidad a la reacción de Indol a la descarboxilación de la ornitina.
Procedimiento:
Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a
medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar
distintos microorganismos presentes.
Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la
actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en
un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no.
Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de múltiples medios, los
cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo
en estudio.
De la amplia variedad de pruebas bioquímicas, nosotros en laboratorio
utilizaremos 10, aplicados a 5 especies de microorganismos.
Además estudiaremos los resultados que estos test arrojan, comparando
resultados experimentales entre los distintos grupos de trabajo de nuestro
laboratorio.
Objetivos dentro del laboratorio.
Realizar las pruebas adecuadamente y poder identificar -aplicando éste
método- distintos microorganismos.
Debemos conocer cuál de los test que componen las pruebas bioquímicas
es o son el (los) adecuado(s) de acuerdo a la circunstancia que
necesitemos estudiar.
Entender los principios bioquímicos de las pruebas.
Ser capaces de interpretar adecuadamente los resultados entregados por
las pruebas bioquímicas
Conocer el uso de las pruebas bioquímicas para la identificación de
microorganismos
Identificar errores de procedimiento en el laboratorio al realizar los
experimentos y poder reconocer en que partes del procedimiento se
cometió el o los errores, para así, mediante el desarrollo experimental
conocer mas profundamente las pruebas bioquímicas.
,PRUEBAS RAPIDAS:
Prueba de la Oxidasa
El objetivo de la prueba “Oxidasa” es buscar la presencia de la
enzima Citocromo C oxidasa.
Se trata de un enzima que oxida el citocromo C de la cadena transportadora
de e-. Este se detecta utilizando el tetra para fenilendiamina: el reactivo de
oxidasa contiene este compuesto que va a ser oxidado por la citocromo C
oxidasa. En estado reducido es incolora, pero cuando se oxida vira a
púrpura.
Procedimiento:
Con un pequeño papel de filtro añadimos reactivo de Kovacs, lo
impregnamos y a partir del tubo con la bacteria problema tomamos un poco
con el asa de platino y ponemos en el papel. Tras unos 30 segundos,
observamos si ha ocurrido algún cambio.
Las bacterias que dan positivo a esta prueba tienen generalmente un ciclo
respiratorio oxidativo.
Se considera positva esta prueba cuando toma un color púrpura la muestra.
Resultados:
(+) Pseudomonas aeruginosa
( - ) Escherichia coli
Prueba de la Catalasa
El Objetivo es buscar la presencia de la enzima catalasa
El peróxido de hidrógeno se produce al utilizar la bacteria el azúcar por vía
oxidativa. Al ser éste un compuesto muy oxidante las bacterias la eliminan
mediante la producción de la enzima catalasa (H2O2 -> H2O + ½ O2).
Procedimiento:
Agregamos aproximadamente 5 ml. de peróxido de hidrógeno al 3% a un
tubo de ensayo previamente esterilizado a continuación tomamos una
muestra de la cepa del microorganismo a estudiar y la introducimos por el
tubo de ensayo, la muestra solamente debe acercarse a la muestra de la
solución liquida de peróxido de hidrogeno y debemos observar la reacción
, de esta.
La prueba se considera como positiva si observamos burbujas de oxígeno.
Resultados:
(+) Staphylococcus aureus
( - ) Streptococcus spp.
Prueba de la Coagulasa
La coagulasa es un enzima capaz de desnaturalizar la bibrina del plasma. El
objetivo es buscar en factor de aglutinación de los microorganismos cuando
estos se mezclan con el plasma. Esta prueba se utiliza para diferenciar
microorganismos del genero Staphylococcus.
Procedimiento:
Preparamos una mezcla de 0,1 ml. de CCC (caldo cerebro corazón) y 0,3
ml. de plasma de conejo en un tubo de ensayo previamente esterilizado. La
muestra ya contiene cepas de St. Aureus. Tapamos el tubo de ensayo con
algodón hidrofílico y lo llevamos a baño María a 37° C durante una hora,
observando la muestra cada 15 minutos. Al completa la hora, sacamos las
muestras y observamos sus resultados.
Resultados:
Estratificaremos los resultados en 4 distintos niveles:
1: pequeños coágulos no organizados
2: pequeños coágulos organizados
3: gran coágulo organizado
4: todo el contenido aparece coagulado y se mantiene cuando invierte el
tubo.
Se consideran positivos los niveles 3 y 4.
(+) Staphylococcus aureus
( - ) Staphylococcus epidermis.
PBAS BIOQUIMICAS
Prueba MIO (Motility-Indole-Ornitine ó Motilidad-Indol-Ornitina)
Esta prueba bioquímica permite identificar bacterias de acuerdo a su
motilidad a la reacción de Indol a la descarboxilación de la ornitina.
Procedimiento:
