Colorimetrische methoden
Biuret assay Lowry assay Bradford assay Ninhydrine assay BCA assay Colloïdaal goud assay
Gevoeligheid 1 - 6 mg/ml 0,01 - 1 mg/ml 5 - 40 µg/ml 1 - 10 µg/ml 0,5 - 10 µg/ml > 100 ng/ml
1_ - 6000k ng/ml 10k - 1000k ng/ml 5k - 40k ng/ml 1k - 10k ng/ml 500 - 10k ng/ml
Variabiliteit Onafhankelijk Variabel Variabel Weinig Variabel Variabel
Interferentie DTT, βME DTT, βME, EDTA, Detergenten en / Sucrose, DDT, βME, Enkel thiolen en SDS
(Reducerende zuren, detergenten, sterke base EDTA, zuren
agentia) sucrose, …
Niet door
Niet door reagentia detergenten Niet door reagentia
Fluorimetrische methoden
Fluorescamine ortho-ftalaldehyde (OPA) CBQCA NanoOrange protein assay
Gevoelig: 500 ng eiwit Stabiel Werkt ook in aanwezigheid van Zeer gevoelig: tot 10 ng/ml
Snelle reactie lipiden
Grote dynamische range
Variabiliteit tussen eiwitten Vereist βME Vereist cyanine
Snelle hydrolyse
Niet compatible met amines
(bv. Tris of glycine)
, Principe + -
Western blotting SDS-PAAGE → elektroblotting → immunodetectie
Antilichaam micro-arrays Membr. met #antilichamen tegen verschillende - Hogere troughput (parallele - Beperkt tot antilichamen op
eiwitten → herkend = binden → #gebonden analyse) <-> W array
detecteren met 2nd antilichaam - Commercieel verkrijgbaar
Flow cytometrie Eiwitten met gefixeerde/permeabiliseerde - Single cell info - Geen info molecuulgewicht
fluorochromen langs laser passeren - Gevoeliger/kwantitatiever <-> W - Duur & complexe data analyse
→ Fosfo-flow - Detectie niet-gedenatureerde
eiwitten
ELISA Binding eiwiten (antigenen) in oplossing met - Gevoeliger/kwantitatiever <-> W - Geen single cell info
antilichaam geeft kleurreactie → spectrofotometer - Detectie niet-gedenatureerde - Geen info molecuulgewicht
→ Antilichaam gekoppeld met reporter enzyme die eiwitten
substraatomzetting doet (indirect)
RIA Radio-actief antigeen in competitie met te - Gevoeliger <-> ELISA - Radioactiviteit
kwantificeren antigeen → meten reductie in
radioactiviteit controle-competitie staal
T: diagnostiek
Immunohistochemie In situ (cellen/weefsels) - Exacte plaats eiwit in cel zien - Tijdrovend
Detectie: kleurreactie (AP of HRP) OF
immunofluorescentie
Amplificatie: ABC methode, HRP polymeer, tyramide
amplificatie
T: expressie in weefsels, pathologische diagnostiek,
weefsel micro-array, analyse subcellulaire locatie
Biuret assay Lowry assay Bradford assay Ninhydrine assay BCA assay Colloïdaal goud assay
Gevoeligheid 1 - 6 mg/ml 0,01 - 1 mg/ml 5 - 40 µg/ml 1 - 10 µg/ml 0,5 - 10 µg/ml > 100 ng/ml
1_ - 6000k ng/ml 10k - 1000k ng/ml 5k - 40k ng/ml 1k - 10k ng/ml 500 - 10k ng/ml
Variabiliteit Onafhankelijk Variabel Variabel Weinig Variabel Variabel
Interferentie DTT, βME DTT, βME, EDTA, Detergenten en / Sucrose, DDT, βME, Enkel thiolen en SDS
(Reducerende zuren, detergenten, sterke base EDTA, zuren
agentia) sucrose, …
Niet door
Niet door reagentia detergenten Niet door reagentia
Fluorimetrische methoden
Fluorescamine ortho-ftalaldehyde (OPA) CBQCA NanoOrange protein assay
Gevoelig: 500 ng eiwit Stabiel Werkt ook in aanwezigheid van Zeer gevoelig: tot 10 ng/ml
Snelle reactie lipiden
Grote dynamische range
Variabiliteit tussen eiwitten Vereist βME Vereist cyanine
Snelle hydrolyse
Niet compatible met amines
(bv. Tris of glycine)
, Principe + -
Western blotting SDS-PAAGE → elektroblotting → immunodetectie
Antilichaam micro-arrays Membr. met #antilichamen tegen verschillende - Hogere troughput (parallele - Beperkt tot antilichamen op
eiwitten → herkend = binden → #gebonden analyse) <-> W array
detecteren met 2nd antilichaam - Commercieel verkrijgbaar
Flow cytometrie Eiwitten met gefixeerde/permeabiliseerde - Single cell info - Geen info molecuulgewicht
fluorochromen langs laser passeren - Gevoeliger/kwantitatiever <-> W - Duur & complexe data analyse
→ Fosfo-flow - Detectie niet-gedenatureerde
eiwitten
ELISA Binding eiwiten (antigenen) in oplossing met - Gevoeliger/kwantitatiever <-> W - Geen single cell info
antilichaam geeft kleurreactie → spectrofotometer - Detectie niet-gedenatureerde - Geen info molecuulgewicht
→ Antilichaam gekoppeld met reporter enzyme die eiwitten
substraatomzetting doet (indirect)
RIA Radio-actief antigeen in competitie met te - Gevoeliger <-> ELISA - Radioactiviteit
kwantificeren antigeen → meten reductie in
radioactiviteit controle-competitie staal
T: diagnostiek
Immunohistochemie In situ (cellen/weefsels) - Exacte plaats eiwit in cel zien - Tijdrovend
Detectie: kleurreactie (AP of HRP) OF
immunofluorescentie
Amplificatie: ABC methode, HRP polymeer, tyramide
amplificatie
T: expressie in weefsels, pathologische diagnostiek,
weefsel micro-array, analyse subcellulaire locatie
