Casus 1A: neurale buis defect
Grhl2 verlies resulteert in abnormale mesenchymale fenotypes in non neuronaal ectoderm
en neurale lijst cellen. Het verlies van neuronale ectoderm integriteit speelt een rol in het
niet kunnen bewegen naar de middenlijn van de craniale neurale vouwen, wat leidt tot
neurale buis defect. 6 NNE-expressed die downreguleerd zijn in Ghrl2 mutanten zijn
geidentificeerd. Deze zijn supressors van EMT. Dus Grhl2 promoot de epitheliale integriteit
van NNE door het activeren van epitheliale genen en het tegengaan (supressen) van EMT
m.b.v. downsteam genen (die 6 NNE-expressed genen die downgereguleerd zijn)
Figuur 1: : Je ziet doorsnedes waarbij je bij NB de neurale buis ziet en bij de pijl het NNE in
wildtype en mutant muis. Bij de mutantmuis zie je heel losmazig NNE epitheel (anders
georganiseerd). Dat is ook aangetoond met markers (ZO-1 en Vimentin). ZO-1 is een
epitheliale marker, in wildtype zie je daar veel van en in mutant zie je daar veel minder van.
Vimentin is een mesenchymale marker, daar hoort niet veel van te zijn bij het wildtype en in
de mutant zie je daar juist meer kleuring van
o Immunocytochemie = waar en wanneer komt eiwit tot expressie?
o Grhl2 gemuteerd NNE laat verlies in epitheliale integriteit (ZO-1) en verhoogde
mesenchymale eigenschappen (Vimentin) zien
, Tabel 1: de expressie van genen in
NNE vergeleken met expressie in
andere delen embryo.
o Gekleurde marker gebruikt
waardoor specifiek het NNE
geïsoleerd kon worden met
fluerescentie dus toen
hebben ze met FACS analyse
het NNE gescheiden van
andere weefsels van embryo
en toen hebben ze die 2 pools
van weefsels vergeleken
m.b.v. RNA sequencing.
Daarbij kwam Tabel 1 eruit
(lijst aan genen), dat die
verhoogd tot expressie
komen in NNE. Toen hebben
ze gekeken in literatuur
studie wat al die genen doen
en toen vonden ze 6 EMT
suppressors. In figuur 4 zie je
dat in de Grhl2 mutant deze
genen verminderd tot
expressie komen. Het idee is
dat Grhl2 deze genen
normaliter moet activeren en
de EMT onderdrukken. In de
mutant gebeurd dat niet, dus
heb je niet die onderdrukking
van EMT dus krijg je meer
mesenchym.
o Figuur 4 hoeft niet
Figuur 6: in Figuur 6 worden EMT
suppressors onderdrukt met short
hairpin RNA en dat leidt tot meer mesenchymaal achtige cellen.
o ZO-1 (epitheliaal) marker is groen, Vimentin (mesenchymaal) is rood
o Als je in de wildtype muis kijkt, zie je veel groen en geen rood.
o Als je Grhl2 onderdruk zie je minder groen en meer rood
o Zelfde geldt voor alle andere 5 EMT suppressors (meer rood en minder groen)
o Ook zie je in H tm N dat er een switch is van E-cadherine (Epitheliaal) naar N -
cadherine.
Grhl2 verlies resulteert in abnormale mesenchymale fenotypes in non neuronaal ectoderm
en neurale lijst cellen. Het verlies van neuronale ectoderm integriteit speelt een rol in het
niet kunnen bewegen naar de middenlijn van de craniale neurale vouwen, wat leidt tot
neurale buis defect. 6 NNE-expressed die downreguleerd zijn in Ghrl2 mutanten zijn
geidentificeerd. Deze zijn supressors van EMT. Dus Grhl2 promoot de epitheliale integriteit
van NNE door het activeren van epitheliale genen en het tegengaan (supressen) van EMT
m.b.v. downsteam genen (die 6 NNE-expressed genen die downgereguleerd zijn)
Figuur 1: : Je ziet doorsnedes waarbij je bij NB de neurale buis ziet en bij de pijl het NNE in
wildtype en mutant muis. Bij de mutantmuis zie je heel losmazig NNE epitheel (anders
georganiseerd). Dat is ook aangetoond met markers (ZO-1 en Vimentin). ZO-1 is een
epitheliale marker, in wildtype zie je daar veel van en in mutant zie je daar veel minder van.
Vimentin is een mesenchymale marker, daar hoort niet veel van te zijn bij het wildtype en in
de mutant zie je daar juist meer kleuring van
o Immunocytochemie = waar en wanneer komt eiwit tot expressie?
o Grhl2 gemuteerd NNE laat verlies in epitheliale integriteit (ZO-1) en verhoogde
mesenchymale eigenschappen (Vimentin) zien
, Tabel 1: de expressie van genen in
NNE vergeleken met expressie in
andere delen embryo.
o Gekleurde marker gebruikt
waardoor specifiek het NNE
geïsoleerd kon worden met
fluerescentie dus toen
hebben ze met FACS analyse
het NNE gescheiden van
andere weefsels van embryo
en toen hebben ze die 2 pools
van weefsels vergeleken
m.b.v. RNA sequencing.
Daarbij kwam Tabel 1 eruit
(lijst aan genen), dat die
verhoogd tot expressie
komen in NNE. Toen hebben
ze gekeken in literatuur
studie wat al die genen doen
en toen vonden ze 6 EMT
suppressors. In figuur 4 zie je
dat in de Grhl2 mutant deze
genen verminderd tot
expressie komen. Het idee is
dat Grhl2 deze genen
normaliter moet activeren en
de EMT onderdrukken. In de
mutant gebeurd dat niet, dus
heb je niet die onderdrukking
van EMT dus krijg je meer
mesenchym.
o Figuur 4 hoeft niet
Figuur 6: in Figuur 6 worden EMT
suppressors onderdrukt met short
hairpin RNA en dat leidt tot meer mesenchymaal achtige cellen.
o ZO-1 (epitheliaal) marker is groen, Vimentin (mesenchymaal) is rood
o Als je in de wildtype muis kijkt, zie je veel groen en geen rood.
o Als je Grhl2 onderdruk zie je minder groen en meer rood
o Zelfde geldt voor alle andere 5 EMT suppressors (meer rood en minder groen)
o Ook zie je in H tm N dat er een switch is van E-cadherine (Epitheliaal) naar N -
cadherine.
