MBE Meetrapport Transformatie
Leerjaar 2 Biologie en Medisch Laboratoriumonderzoek MBE
Doel Transformatie
Het doel van transformatie is het inbrengen van vreemd DNA in een gastheer. In dit geval gaat het
om het inbrengen van de nieuwe plasmide in competente E.coli DH5α bacteriën. Bacteriën kunnen
zich snel voortplanten, waardoor het ingebrachte DNA zich ook snel vermenigvuldigt. Door middel
van deze transformatie zal het fusie-eiwit (H2B en GFP) in grote hoeveelheden worden
geproduceerd.
Voor de transformatie is gebruik gemaakt van de heat-shock-methode. Door de heat-shock worden
de celmembranen van de bacteriën geopend. Door deze opening kan de nieuwe plasmide worden
opgenomen in de bacteriën.
De transformatie wordt uitgevoerd om te controleren of de digestie en ligatie van de plasmide en het
H2B-product succesvol zijn verlopen. Als dit het geval is, kan de plasmide worden vermenigvuldigd
door de bacteriën. Hiermee kan vervolgens worden verder gewerkt, om o.a. te controleren of de
insertie aanwezig is.
Verwachting Transformatie
Plaa Wat is er uitgeplaat? Voedingsbode Verwachting*
t m
1 10 µl van ligatiemengsel 1: H2B Ampicilline Er wordt groei van
product met plasmide (pDM317) bodem kolonies verwacht.
100 µl competente E.coli DH5α
bacteriën
2 10 µl van ligatiemengsel 2: Ampicilline Er wordt weinig tot
opengeknipte en geCIPte bodem geen groei van
plasmide kolonies verwacht.
100 µl competente E.coli DH5α
bacteriën
3 1 µl van de ongeknipte plasmide Ampicilline Er wordt groei van
Positieve
controle
(zonder H2B) bodem kolonies verwacht.
100 µl competente E.coli DH5α
bacteriën
4 100 µl competente E.coli DH5α Ampicilline Er wordt geen
Negatieve
controle bacteriën bodem groei van kolonies
verwacht.
5 100 µl competente E.coli DH5α Bodem zonder Er wordt groei van
Negatieve
controle bacteriën ampicilline kolonies verwacht.
Tabel 1: verwachtingen van de transformatie
Leerjaar 2 Biologie en Medisch Laboratoriumonderzoek MBE
Doel Transformatie
Het doel van transformatie is het inbrengen van vreemd DNA in een gastheer. In dit geval gaat het
om het inbrengen van de nieuwe plasmide in competente E.coli DH5α bacteriën. Bacteriën kunnen
zich snel voortplanten, waardoor het ingebrachte DNA zich ook snel vermenigvuldigt. Door middel
van deze transformatie zal het fusie-eiwit (H2B en GFP) in grote hoeveelheden worden
geproduceerd.
Voor de transformatie is gebruik gemaakt van de heat-shock-methode. Door de heat-shock worden
de celmembranen van de bacteriën geopend. Door deze opening kan de nieuwe plasmide worden
opgenomen in de bacteriën.
De transformatie wordt uitgevoerd om te controleren of de digestie en ligatie van de plasmide en het
H2B-product succesvol zijn verlopen. Als dit het geval is, kan de plasmide worden vermenigvuldigd
door de bacteriën. Hiermee kan vervolgens worden verder gewerkt, om o.a. te controleren of de
insertie aanwezig is.
Verwachting Transformatie
Plaa Wat is er uitgeplaat? Voedingsbode Verwachting*
t m
1 10 µl van ligatiemengsel 1: H2B Ampicilline Er wordt groei van
product met plasmide (pDM317) bodem kolonies verwacht.
100 µl competente E.coli DH5α
bacteriën
2 10 µl van ligatiemengsel 2: Ampicilline Er wordt weinig tot
opengeknipte en geCIPte bodem geen groei van
plasmide kolonies verwacht.
100 µl competente E.coli DH5α
bacteriën
3 1 µl van de ongeknipte plasmide Ampicilline Er wordt groei van
Positieve
controle
(zonder H2B) bodem kolonies verwacht.
100 µl competente E.coli DH5α
bacteriën
4 100 µl competente E.coli DH5α Ampicilline Er wordt geen
Negatieve
controle bacteriën bodem groei van kolonies
verwacht.
5 100 µl competente E.coli DH5α Bodem zonder Er wordt groei van
Negatieve
controle bacteriën ampicilline kolonies verwacht.
Tabel 1: verwachtingen van de transformatie
