Samenvatting les 1(deel2)/6 van Biotechnologie

Biotechnologie Les 1: What has Biology ever done for us?


DNA basic tools
Helix antiparallel: suiker (3), fosfaat (5) en nucleobase
 1 veranderen  verandert DNA functie.

DNA beschrijven
- 5’  3’
o Zelfde oriëntatie: DNA- en RNA-
synthese door polymerasen.
o Zelfde oriëntatie als ribosomen
langs mRNA bewegen (TxL).
- Polymerase: anti-sens streng als
templaat om de sens RNA streng te
transcriberen.

sense, plus, non-templaat
anti-sense, min, templaat


Klassieke moleculaire biologie
‘Cut and paste’
- Nucleases als knippende tools
- Ligases als plakkende tools

Restrictie-endonucleasen (cut)
- Verdedigingsfunctie in vivo
o Activiteit gekoppeld aan een methylase die protectie biedt aan gastheer-DNA.
- Orthodoxe type II endonuclease
o Dimeren
o Herkent palindroomsequenties van 4-8 bp
 Reverse en complement streng zijn dezelfde
o Splitsingsplaats binnen bindingsplaats

DNA ligasen (paste)
- Enzymen die DNA-uiteinden verbinden
o Bindt ATP en brengt AMP naar zichzelf en dan DNA (naar 5’ fosfaat)
o Geactiveerd gefosforyleerd 5’-uiteinde valt vrij 3’-hydroxyl in enzym aan.
- Ligasen in moleculaire biologie
o Gevoelig voor DNA-vervormingen (distortions)
o Extreem gevoelig voor P-psoitionering




Cohesieve of sticky einde blunt end
 ligeert enkel aan een ander blunt end, geen overhangs.

, Biotechnologie Les 1: What has Biology ever done for us?



EcoRI – G’AATT,C









Case-by-case antwoorden
Compromise over het algemeen vereist
Duur
Case-by-case resultaten