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Superfiche interaction protéine
ADN
Méthodes d’analyse :
Chromato d’affinité à l’héparine → Ressemble à l’ADN donc prot avec affinité
pour ADN se fixent dessus puis élution par gradient de sel
Retard sur gel (où on révèle l’ADN ou alors la protéine = 2 approches
différentes)
Séquençage par la méthode Maxam Gilbert → Marquage gamma P32 et clivage
derrière des nt spé (G, A etG, T et C ou C) Puis électrophorèse et radiographie
Séquençage par la méthode de Sanger : On met des ddNTP en qté limitée soit
marqué au P32 (on ajoute 1 ddNTP à la fois) soit marqué par un fluorophore
(couleur diff pour chaque ddNTP)
Empreinte à l’exonucléase : ADN marqué sur 1 extremité → Exonucléase
dégrade de 3’ → 5’ (arrête au niveau de la prot)
On réitère l’exp en marquant l’autre brin → En comparant les électrophorèses on
déduit le site d’intéraction par recoupmt
Empreinte à la DNase I : Conditions ménagées = 1 coupure par molécule d’ADN
puis électrophorèse
Structure de l’ADN :
Superfiche interaction protéine ADN 1
, Lien formé entre 3’ et 5’ mais élongation dans le sens 5’→3’
AT : 2LH GC : 3LH
Longueur grand sillon : 12 A, petit sillon : 6A, pas db hélice : 34A, largeur hélice =
24A
Pas hélice alpha = 5,4A
Compaction de l’ADN chez les eucaryotes :
Octomère d’histone entourés d’ADN = Nucléosome
3 confos d’ADN :
A = forme transitoire (Hélice doite avec pas plus petit)
B = Forme majoritaire (Hélice droite, 10 pb par tour)
Z = Séquence GC à forte [sel] (Hélice gauche avec pas plus grand)
Dans chaque base : sites donneurs et d’autres accepteurs
Superfiche interaction protéine ADN 2
Superfiche interaction protéine
ADN
Méthodes d’analyse :
Chromato d’affinité à l’héparine → Ressemble à l’ADN donc prot avec affinité
pour ADN se fixent dessus puis élution par gradient de sel
Retard sur gel (où on révèle l’ADN ou alors la protéine = 2 approches
différentes)
Séquençage par la méthode Maxam Gilbert → Marquage gamma P32 et clivage
derrière des nt spé (G, A etG, T et C ou C) Puis électrophorèse et radiographie
Séquençage par la méthode de Sanger : On met des ddNTP en qté limitée soit
marqué au P32 (on ajoute 1 ddNTP à la fois) soit marqué par un fluorophore
(couleur diff pour chaque ddNTP)
Empreinte à l’exonucléase : ADN marqué sur 1 extremité → Exonucléase
dégrade de 3’ → 5’ (arrête au niveau de la prot)
On réitère l’exp en marquant l’autre brin → En comparant les électrophorèses on
déduit le site d’intéraction par recoupmt
Empreinte à la DNase I : Conditions ménagées = 1 coupure par molécule d’ADN
puis électrophorèse
Structure de l’ADN :
Superfiche interaction protéine ADN 1
, Lien formé entre 3’ et 5’ mais élongation dans le sens 5’→3’
AT : 2LH GC : 3LH
Longueur grand sillon : 12 A, petit sillon : 6A, pas db hélice : 34A, largeur hélice =
24A
Pas hélice alpha = 5,4A
Compaction de l’ADN chez les eucaryotes :
Octomère d’histone entourés d’ADN = Nucléosome
3 confos d’ADN :
A = forme transitoire (Hélice doite avec pas plus petit)
B = Forme majoritaire (Hélice droite, 10 pb par tour)
Z = Séquence GC à forte [sel] (Hélice gauche avec pas plus grand)
Dans chaque base : sites donneurs et d’autres accepteurs
Superfiche interaction protéine ADN 2
