Tema 5: Cultivos Celulares.
1. Introducción.
El análisis citogenético consiste en la obtención de una persona con el fin de visualizar los cromosomas y detectar la
presencia de alteraciones en el número o en la estructura de estos.
Para visualizarlos necesitamos cromosomas en METAFASE, que solo es posible en tejidos que se dividen
espontáneamente con proliferación rápida (gónadas, médula ósea, trofoblasto o tumores). Se realizan cultivos celulares
(obteniendo METAFASE): Primero extensión de cromosomas en portaobjeto, segundo tinción, tercero bandeo.
2. Cultivos celulares.
Son conjuntos de técnicas que permiten el mantenimiento de las células pluricelulares in vitro, manteniendo al máximo
sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas. Tiene como objetivo obtener un número suficiente de células en
metafase que permitan el análisis cromosómico.
- Material biológico para cultivo:
o Líquido amniótico.
o Vellosidad corial.
o Sangre periférica.
o Médula ósea.
o Piel.
- Cultivos en órganos:
o Solo proliferan en células de la periferia del órgano.
o Las células no se pueden propagar.
o Tienen baja reproductibilidad.
o Se mantiene vivo durante un tiempo limitado:
▪ Diferenciación celular.
▪ Estructura histológica.
▪ Arquitectura del órgano.
▪ A ser posible la funcionalidad.
- Cultivos de explantes primarios:
o Porción del tejido vivo separado del órgano.
▪ Material biológico: vellosidades coriónicas y tejido epitelial (fibroblastos).
o Cultivo:
▪ Se adhiere a una superficie (placa de Petri).
▪ Se nutre con medio de cultivo.
▪ Las células periféricas se multiplican y proliferan (migran por toda la superficie).
- Cultivos celulares:
o Es la técnica de cultivo más habitual.
o Se realiza a partir de suspensiones celulares (SC), su material biológico (cualquier tipo celular).
o Procedencia:
▪ Disgregación de un tejido.
▪ Células de la periferia de un explante.
o Pasos:
▪ Introducción de SC en recipiente con un medio de cultivo.
▪ Incubación en condiciones óptimas.
▪ Proliferación celular (aumentan la masa del tejido a estudiar).
▪ INCONVENIENTE: Si se parte de una masa celular heterogénea, se puede perder esta
heterogeneidad debido al alto crecimiento de poblaciones predominantes.
o Según la procedencia de la
muestra:
*Subcultivo: Despegar las células
de un cultivo y resembrarlos con
el fin de estimular la división
celular.
, - Cultivo organotípicos: Conviven varios tipos celulares, intentando reproducir al máximo posible la estructura del
tejido in vitro.
o Finalidad: Generar tejidos y órganos completamente funcionales, pudiendo utilizarlos en injertos y
trasplantes.
*EJEMPLOS DE MUESTRAS*
3. Biología de las células en cultivo.
A partir de tejidos embrionarios, fetales o del adulto es posible aislar células de cualquier tejido. Bajo condiciones
adecuadas de crecimiento es posible que in vitro se induzca su proliferación o diferenciación. Bajo condiciones
especiales se puede inducir la transformación de algunas células, se pueden propagar de manera clonal y establecer
con ello una línea celular, la cual guarda las características del tejido de origen. Las líneas a su vez pueden ser
propagados de manera indefinida en monocapa o en suspensión.
- Curva de crecimiento del cultivo: Representación gráfica de la dinámica de crecimiento de un cultivo, se observa
cómo varia día a día la concentración de células.
o Adaptación celular (LAG): Supervivencia en corta duración (<24h). cambios metabólicos sin crecimiento,
adhesión en monocapa.
o Crecimiento logarítmico (LOG): Intento de crecimiento y proliferación (aprox 7 días), colonias en
monocapa.
o Estacionaria (Plateau): Detención del crecimiento, monocapa, se inhibe por contacto en monocapa y por
densidad en suspensión.
o Envejecimiento: Muerte celular.
- Formas de crecimiento:
o Crecimiento en monocapa: Tres etapas de desarrollo.
▪ Adhesión a la superficie (fase de latencia).
▪ Proliferación y formación de colonias (fase exponencial).
▪ Inhibición por contacto: Dejan de dividirse y siguen vivas (fase estacionaria). Pase (pasar parte de
las células a un nuevo frasco de cultivo) subcultivo; se reanuda el cultivo.
o Crecimiento en suspensión:
▪ Crecimiento celular disperso en el medio de cultivo.
▪ Las células no necesitan adherirse a una superficie para crecer.
1. Introducción.
El análisis citogenético consiste en la obtención de una persona con el fin de visualizar los cromosomas y detectar la
presencia de alteraciones en el número o en la estructura de estos.
Para visualizarlos necesitamos cromosomas en METAFASE, que solo es posible en tejidos que se dividen
espontáneamente con proliferación rápida (gónadas, médula ósea, trofoblasto o tumores). Se realizan cultivos celulares
(obteniendo METAFASE): Primero extensión de cromosomas en portaobjeto, segundo tinción, tercero bandeo.
2. Cultivos celulares.
Son conjuntos de técnicas que permiten el mantenimiento de las células pluricelulares in vitro, manteniendo al máximo
sus propiedades fisiológicas, bioquímicas y genéticas. Tiene como objetivo obtener un número suficiente de células en
metafase que permitan el análisis cromosómico.
- Material biológico para cultivo:
o Líquido amniótico.
o Vellosidad corial.
o Sangre periférica.
o Médula ósea.
o Piel.
- Cultivos en órganos:
o Solo proliferan en células de la periferia del órgano.
o Las células no se pueden propagar.
o Tienen baja reproductibilidad.
o Se mantiene vivo durante un tiempo limitado:
▪ Diferenciación celular.
▪ Estructura histológica.
▪ Arquitectura del órgano.
▪ A ser posible la funcionalidad.
- Cultivos de explantes primarios:
o Porción del tejido vivo separado del órgano.
▪ Material biológico: vellosidades coriónicas y tejido epitelial (fibroblastos).
o Cultivo:
▪ Se adhiere a una superficie (placa de Petri).
▪ Se nutre con medio de cultivo.
▪ Las células periféricas se multiplican y proliferan (migran por toda la superficie).
- Cultivos celulares:
o Es la técnica de cultivo más habitual.
o Se realiza a partir de suspensiones celulares (SC), su material biológico (cualquier tipo celular).
o Procedencia:
▪ Disgregación de un tejido.
▪ Células de la periferia de un explante.
o Pasos:
▪ Introducción de SC en recipiente con un medio de cultivo.
▪ Incubación en condiciones óptimas.
▪ Proliferación celular (aumentan la masa del tejido a estudiar).
▪ INCONVENIENTE: Si se parte de una masa celular heterogénea, se puede perder esta
heterogeneidad debido al alto crecimiento de poblaciones predominantes.
o Según la procedencia de la
muestra:
*Subcultivo: Despegar las células
de un cultivo y resembrarlos con
el fin de estimular la división
celular.
, - Cultivo organotípicos: Conviven varios tipos celulares, intentando reproducir al máximo posible la estructura del
tejido in vitro.
o Finalidad: Generar tejidos y órganos completamente funcionales, pudiendo utilizarlos en injertos y
trasplantes.
*EJEMPLOS DE MUESTRAS*
3. Biología de las células en cultivo.
A partir de tejidos embrionarios, fetales o del adulto es posible aislar células de cualquier tejido. Bajo condiciones
adecuadas de crecimiento es posible que in vitro se induzca su proliferación o diferenciación. Bajo condiciones
especiales se puede inducir la transformación de algunas células, se pueden propagar de manera clonal y establecer
con ello una línea celular, la cual guarda las características del tejido de origen. Las líneas a su vez pueden ser
propagados de manera indefinida en monocapa o en suspensión.
- Curva de crecimiento del cultivo: Representación gráfica de la dinámica de crecimiento de un cultivo, se observa
cómo varia día a día la concentración de células.
o Adaptación celular (LAG): Supervivencia en corta duración (<24h). cambios metabólicos sin crecimiento,
adhesión en monocapa.
o Crecimiento logarítmico (LOG): Intento de crecimiento y proliferación (aprox 7 días), colonias en
monocapa.
o Estacionaria (Plateau): Detención del crecimiento, monocapa, se inhibe por contacto en monocapa y por
densidad en suspensión.
o Envejecimiento: Muerte celular.
- Formas de crecimiento:
o Crecimiento en monocapa: Tres etapas de desarrollo.
▪ Adhesión a la superficie (fase de latencia).
▪ Proliferación y formación de colonias (fase exponencial).
▪ Inhibición por contacto: Dejan de dividirse y siguen vivas (fase estacionaria). Pase (pasar parte de
las células a un nuevo frasco de cultivo) subcultivo; se reanuda el cultivo.
o Crecimiento en suspensión:
▪ Crecimiento celular disperso en el medio de cultivo.
▪ Las células no necesitan adherirse a una superficie para crecer.
