lOMoARcPSD|11700591
Meten van een eiwitconcentratie
Biologie (Fontys)
Practicumvaardigheden januari 2020
Meting van de Eiwitconcentratie
Instructie spectrofotometer, buizenmixer.
Vakdoelen:
Student kan verdunningen maken
Student kan pipetteren
Student kan de spectrofotometer volgens de richtlijnen bedienen
Student kan een ijklijn maken
Student kan een ijklijn gebruiken
Vooraf:
In het laboratorium staat een stamoplossing van 0,3% eiwit.
Hiervan moet je eiwitoplossingen maken met de concentraties
0....6 g /l .
Bereken de verdunningen zodanig dat je in de reageerbuizen meteen het
juiste eindvolume van 2 ml ontstaat.
Zet alle hoeveelheden in een tabel.
Berekening:
, lOMoARcPSD|11700591
Uitvoering:
Materiaal:
10 ml Stamoplossing 0,3 % eiwit
10 ml onbekende eiwitoplossing
50 ml biureetreagens
Reageerbuis rek met 8 reageerbuizen
1 ml, 2 ml en 5 ml verdeelpipetten
Buizenmixer
Spectrofotometer
Cuvet
Het maken van
een ijklijn
Voor hetmaken van een ijklijn zijn een aantal voorbereidingen nodig.
1.oplossingen met bekende concentratie maken
2.zorgen dat de oplossingen gekleurd zijn
3.extincties meten
4.grafiek: ijklijn maken
1en 2.Voorbereiden van de oplossingen
-Etiketteer zes reageerbuizen.
-Vul de reageerbuizen volgens hetpipeteerschema waarin de berekeningen
zijn verwerkt: zie tabel 1
-Aan alle buizen wordt 4 ml biureet als indicator toegevoegd.
-Schud de buizen met de buizenschudder
-Laat de buizen 15 minuten staan.
-Zet ondertussen de spectrofotometer aan en zet hem op een golflengte van
545 nm , bij deze golflengte vindt de meting plaats.
tabel 1: pipeteerschema ijklijn
buis 1 2 3 4 5 6
(blanco) (stam)
Water (ml) 2 1.7 1.5 1.2 0.8 0
Stam- 0 0.3 0.5 0.8 1.2 2
Eiwitoplossin
g
(ml)
Concentratie 0.0 0.4 0.8 1.2 1.6 3.0
(g/l)
Biureet (ml) 4 4 4 4 4 4
Vragen
-beschrijf wat een “blanco” is. Blanco is controle
-wat is de functie van hetbiureet? Geeft erkleur aan zodat hetzichtbaar wordt
-waarom worden de metingen gedaan met een golflengte van 545 nm? Bij
deze golflengte vind de meting plaats dus is hetzichtbaar
3. Extinctiemeten van de bekende concentraties (Na 15 minuten)
- Meten met een cuvet. De cuvet eerst met de oplossing voorspoelen.
Begin bij de laagste concentratie.
- Meet de blanco. Zet de spectrofotometer op 0
- Cuvetten telkens aan de buitenkant schoonvegen.
- Giet na hetmeten monster terug in de buis.
Meten van een eiwitconcentratie
Biologie (Fontys)
Practicumvaardigheden januari 2020
Meting van de Eiwitconcentratie
Instructie spectrofotometer, buizenmixer.
Vakdoelen:
Student kan verdunningen maken
Student kan pipetteren
Student kan de spectrofotometer volgens de richtlijnen bedienen
Student kan een ijklijn maken
Student kan een ijklijn gebruiken
Vooraf:
In het laboratorium staat een stamoplossing van 0,3% eiwit.
Hiervan moet je eiwitoplossingen maken met de concentraties
0....6 g /l .
Bereken de verdunningen zodanig dat je in de reageerbuizen meteen het
juiste eindvolume van 2 ml ontstaat.
Zet alle hoeveelheden in een tabel.
Berekening:
, lOMoARcPSD|11700591
Uitvoering:
Materiaal:
10 ml Stamoplossing 0,3 % eiwit
10 ml onbekende eiwitoplossing
50 ml biureetreagens
Reageerbuis rek met 8 reageerbuizen
1 ml, 2 ml en 5 ml verdeelpipetten
Buizenmixer
Spectrofotometer
Cuvet
Het maken van
een ijklijn
Voor hetmaken van een ijklijn zijn een aantal voorbereidingen nodig.
1.oplossingen met bekende concentratie maken
2.zorgen dat de oplossingen gekleurd zijn
3.extincties meten
4.grafiek: ijklijn maken
1en 2.Voorbereiden van de oplossingen
-Etiketteer zes reageerbuizen.
-Vul de reageerbuizen volgens hetpipeteerschema waarin de berekeningen
zijn verwerkt: zie tabel 1
-Aan alle buizen wordt 4 ml biureet als indicator toegevoegd.
-Schud de buizen met de buizenschudder
-Laat de buizen 15 minuten staan.
-Zet ondertussen de spectrofotometer aan en zet hem op een golflengte van
545 nm , bij deze golflengte vindt de meting plaats.
tabel 1: pipeteerschema ijklijn
buis 1 2 3 4 5 6
(blanco) (stam)
Water (ml) 2 1.7 1.5 1.2 0.8 0
Stam- 0 0.3 0.5 0.8 1.2 2
Eiwitoplossin
g
(ml)
Concentratie 0.0 0.4 0.8 1.2 1.6 3.0
(g/l)
Biureet (ml) 4 4 4 4 4 4
Vragen
-beschrijf wat een “blanco” is. Blanco is controle
-wat is de functie van hetbiureet? Geeft erkleur aan zodat hetzichtbaar wordt
-waarom worden de metingen gedaan met een golflengte van 545 nm? Bij
deze golflengte vind de meting plaats dus is hetzichtbaar
3. Extinctiemeten van de bekende concentraties (Na 15 minuten)
- Meten met een cuvet. De cuvet eerst met de oplossing voorspoelen.
Begin bij de laagste concentratie.
- Meet de blanco. Zet de spectrofotometer op 0
- Cuvetten telkens aan de buitenkant schoonvegen.
- Giet na hetmeten monster terug in de buis.
