Spectrofotometrie voorbereiding
Principe: SPECTROFOTOMETRIE (= totale lichtspectrum in rekening brengen)
• substanties absorberen electromagnetische straling aan bepaalde
golflengtes
• lichtbundel door een lichtabsorberende oplossing in cuvet sturen
vermindering van lichtintensiteit (extinctie E (~C))
• COLORIMETRIE: houdt enkel rekening met zichtbaar licht
Doel proef: De concentratie van mangaan (Mn 2+) bepalen in onbekende
oplossingen
• Colorometrische absorptie Mn2+ niet voldoende om te kunnen meten
→ omzetting vanmangaan tot colorimetrisch actief product (= permanganaat,
paarse oplossing):
+¿ ¿
−¿ +5IO −¿ +6 H ¿¿
3
−¿+ 3 H2 O →2 MnO4 ¿
2+¿+5 IO4 ¿
2 Mn
−¿ ¿
• Vorming paars gekleurd reactieproduct ( Mn O 4 ) dat zichtbaar licht
absorbeert
• Concentratie voorspellen op basis van absorptiegedrag
• Hoe absorptie (=extinctie) berekenen?
I 0 Intensiteit invallend licht
• E=log =
I Intensiteit uittredend licht
• Extinctie afhankelijk van de golflengte
• Verschillende van molecule tot molecule
• Per substantie absorptiecurve
, Verloop proef:
1. Voorbereiden oplossingen (= oplossing in juiste mate verdunnen +
oxidatie reductie)
2. Opstellen van het absorptiecurve ¿ en max bepalen
• Landamax = golflengte waarbij maximale absorptie optreedt
• Bij iedere golflengte: E op nul via blanco
=> blano meting hangt af van de golflengte
• Bepaling van de blanco: bevat alle reagentia, behalve de te
kwantificeren substantie
3. Bepaling van de cuvetcorrectie bij max
• = correctie voor verschillen tussen cuvetten (o.a. doorlaatlengte,
onparallellisme)
• Meet extinctie van eenzelfde oplossing in tweede cuvet t.o.v. de
eerste cuvet (wordt op nul afgeregeld)
• Mag maximal normaal gezien ± 0.01 zijn
4. Meting standaard oplossingen
5. Meting onbekenden
Voorbeel cuvetcorrectie:
• Beschouw cuvet 1:
cuvet 2:
• Cuvet 1 is een normale cuvet (= referentie cuvet)
• In cuvet 2 is het gebruikte materiaal minder zuiver (bv door het
productieproces)
• Deze onzuiverheden kunnen de absorptie beïnvloeden!
=> onzuiverheden kunnen ook licht absorberen
Je doet een meting met een zelfde standaardoplossing in beide cuvetten:
- Absorptie gemeten in cuvet 1: 0.426
- Absorptie gemeten in cuvet 2: 0.430
Verschil van 0.004 veroorzaakt door verschil in cuvet!
→ Hier moet voor gecorrigeerd worden!
- Van het signaal van cuvet 2 moet dus steeds 0.004 (=
cuvetcorrectie) afgetrokken worden
Principe: SPECTROFOTOMETRIE (= totale lichtspectrum in rekening brengen)
• substanties absorberen electromagnetische straling aan bepaalde
golflengtes
• lichtbundel door een lichtabsorberende oplossing in cuvet sturen
vermindering van lichtintensiteit (extinctie E (~C))
• COLORIMETRIE: houdt enkel rekening met zichtbaar licht
Doel proef: De concentratie van mangaan (Mn 2+) bepalen in onbekende
oplossingen
• Colorometrische absorptie Mn2+ niet voldoende om te kunnen meten
→ omzetting vanmangaan tot colorimetrisch actief product (= permanganaat,
paarse oplossing):
+¿ ¿
−¿ +5IO −¿ +6 H ¿¿
3
−¿+ 3 H2 O →2 MnO4 ¿
2+¿+5 IO4 ¿
2 Mn
−¿ ¿
• Vorming paars gekleurd reactieproduct ( Mn O 4 ) dat zichtbaar licht
absorbeert
• Concentratie voorspellen op basis van absorptiegedrag
• Hoe absorptie (=extinctie) berekenen?
I 0 Intensiteit invallend licht
• E=log =
I Intensiteit uittredend licht
• Extinctie afhankelijk van de golflengte
• Verschillende van molecule tot molecule
• Per substantie absorptiecurve
, Verloop proef:
1. Voorbereiden oplossingen (= oplossing in juiste mate verdunnen +
oxidatie reductie)
2. Opstellen van het absorptiecurve ¿ en max bepalen
• Landamax = golflengte waarbij maximale absorptie optreedt
• Bij iedere golflengte: E op nul via blanco
=> blano meting hangt af van de golflengte
• Bepaling van de blanco: bevat alle reagentia, behalve de te
kwantificeren substantie
3. Bepaling van de cuvetcorrectie bij max
• = correctie voor verschillen tussen cuvetten (o.a. doorlaatlengte,
onparallellisme)
• Meet extinctie van eenzelfde oplossing in tweede cuvet t.o.v. de
eerste cuvet (wordt op nul afgeregeld)
• Mag maximal normaal gezien ± 0.01 zijn
4. Meting standaard oplossingen
5. Meting onbekenden
Voorbeel cuvetcorrectie:
• Beschouw cuvet 1:
cuvet 2:
• Cuvet 1 is een normale cuvet (= referentie cuvet)
• In cuvet 2 is het gebruikte materiaal minder zuiver (bv door het
productieproces)
• Deze onzuiverheden kunnen de absorptie beïnvloeden!
=> onzuiverheden kunnen ook licht absorberen
Je doet een meting met een zelfde standaardoplossing in beide cuvetten:
- Absorptie gemeten in cuvet 1: 0.426
- Absorptie gemeten in cuvet 2: 0.430
Verschil van 0.004 veroorzaakt door verschil in cuvet!
→ Hier moet voor gecorrigeerd worden!
- Van het signaal van cuvet 2 moet dus steeds 0.004 (=
cuvetcorrectie) afgetrokken worden
