Practica microbiologie
Practicum 1
1. Basisprincipes
1.1. Inleiding
- Micro-organismen: in 19de eeuw door L Pasteur aangetoond
- Als ze op voedingsmedium terechtkomen gaan ze groeien waardoor een
cultuur ontstaat
- Reincultuur = cultuur die 1 soort micro-organisme bevat
- Gemengde cultuur = cultuur die meer dan 1 organisme bevat
1.2. Voedingsmedia
- Voedingsmedium bevat nodige voedingsstoffen en groeifactoren zodat
groei van gewenste micro-organismen mogelijk is
- Ook factoren zoals pH, temp, druk, … beïnvloeden groei
- Voedingsmedium moet gesteriliseerd worden: droge warmte, straling,
filtratie
Meestal vochtige warmte
Medium opgekookt en daarna geautoclaveerd in een autoclaaf
o Autoclaveren = een proces waarbij door overdruk warme
stoom wordt gegenereerd tot temperaturen van 121°C.
- Indeling op basis van VORM
Vloeibaar medium
o Micro-organismen zweven vrij rond in cultuurvloeistof
o Verbruiken aanwezige nutriënten en groeifactoren
o Geënt in erlenmeyer
Vast medium
o Zelfde samenstelling vloeibaarmedium + agar
o Agar zal stollen bij temperaturen onder 40-45°C
o Petriplaten / slants
o Mogelijke beperkingen vast medium: uitdroging + minder
toegang tot de aanwezige nutriënten
- Indeling op basis van SAMENSTELLING
Complex medium
o Exacte samenstelling niet gekend
o Vaak gistextract of vleesextract gebruikt als C/N-bron
o Vb. Nutriënt agar (NA), lysogeny broth (LB)
o Betere groei micro-organismen
Synthetisch medium
o Ingrediënten van medium precies gekend en chemisch
gedefinieerd
o Bestaande uit organische en/of anorganische gedefinieerde
componenten
o Beter om invloed van een bepaalde component op de groei
van micro-organismen te bestuderen (want samenstelling is
geweten)
o Hoe eenvoudiger groeimedium, hoe ingewikkelder het
metabolisme van het organisme dat erop groeit
- ( Indeling op basis van SELECTIVITEIT
Algemeen medium
, Selectief medium )
1.3. Enten van voedingsmedia
- Enten = initiële hoeveelheid cellen van het gewenste micro-organisme
aanbrengen op medium
- Enten van vloeibare media
Suspensie aangemaakt van gewenste micro-organisme en hiervan
klein volume naar vloeibare medium
- Enten van vaste media
met entnaald/ oognaald: kolonies opgepikt van medium en
uitgestreken op nieuw groeimedium flamberen!! = steriliseren
entnaald
Streepenting
o Opkweken of onderhouden van een celcultuur
o Zigzag patron
Enting tot reincultuur
o Afzonderlijke, zuivere kolonies verkrijgen
o Celstructuur stelselmatig verdund over oppervlak petriplaat
Strijkplaat
o Cellen gespreid over volledige agaroppervlak
o Mbv Drigalski spatel
Gietplaat
o Enting gebeurt voor medium gestold is
o Na autoclaveren inoculum in medium gebracht en geschud
zodat cellen homogeen verdeeld worden
o Cellen verspreiden zowel binnenin als bovenop agarmedium
1.4. Microscopie
- In practicum: klaarveld lichtmicroscoop 3 lenzensysteem
- 3 lenzen
Condensor
o Licht opvangen en focussen op preparaat
Objectief
o Vangen getransmitteerde lichtbundel op en zorgen voor
beeldvorming en beeldvergroting
Oculair
o Vangen licht van objectieflenzen op, focussen het licht en
zorgen voor laatste beeldvergroting
- Totale vergroting = vergroting objectieflens x vergroting oculairlens
- Oplossend vermogen/ resolving power = kleinste afstand waarop 2 punten
van elkaar moeten liggen zodat ze nog afzonderlijk en scherp kunnen
gezien worden
- Resolutie = het vermogen om 2 kleine en dicht bij elkaar liggende objecten
van elkaar te onderscheiden
Bepaald door golflengte van lichtbron + numerieke apertuur van de
lens + brekingsindex van medium waardoor licht passeert
o Brekingsindex lucht (1) is lager dan glas (1,55) waardoor het
licht afgebogen wordt en een deel van de lichtstralen de
objectieflens niet zal bereiken oplossing: immersieolie
(brekingsindex 1,55)
Practicum 1
1. Basisprincipes
1.1. Inleiding
- Micro-organismen: in 19de eeuw door L Pasteur aangetoond
- Als ze op voedingsmedium terechtkomen gaan ze groeien waardoor een
cultuur ontstaat
- Reincultuur = cultuur die 1 soort micro-organisme bevat
- Gemengde cultuur = cultuur die meer dan 1 organisme bevat
1.2. Voedingsmedia
- Voedingsmedium bevat nodige voedingsstoffen en groeifactoren zodat
groei van gewenste micro-organismen mogelijk is
- Ook factoren zoals pH, temp, druk, … beïnvloeden groei
- Voedingsmedium moet gesteriliseerd worden: droge warmte, straling,
filtratie
Meestal vochtige warmte
Medium opgekookt en daarna geautoclaveerd in een autoclaaf
o Autoclaveren = een proces waarbij door overdruk warme
stoom wordt gegenereerd tot temperaturen van 121°C.
- Indeling op basis van VORM
Vloeibaar medium
o Micro-organismen zweven vrij rond in cultuurvloeistof
o Verbruiken aanwezige nutriënten en groeifactoren
o Geënt in erlenmeyer
Vast medium
o Zelfde samenstelling vloeibaarmedium + agar
o Agar zal stollen bij temperaturen onder 40-45°C
o Petriplaten / slants
o Mogelijke beperkingen vast medium: uitdroging + minder
toegang tot de aanwezige nutriënten
- Indeling op basis van SAMENSTELLING
Complex medium
o Exacte samenstelling niet gekend
o Vaak gistextract of vleesextract gebruikt als C/N-bron
o Vb. Nutriënt agar (NA), lysogeny broth (LB)
o Betere groei micro-organismen
Synthetisch medium
o Ingrediënten van medium precies gekend en chemisch
gedefinieerd
o Bestaande uit organische en/of anorganische gedefinieerde
componenten
o Beter om invloed van een bepaalde component op de groei
van micro-organismen te bestuderen (want samenstelling is
geweten)
o Hoe eenvoudiger groeimedium, hoe ingewikkelder het
metabolisme van het organisme dat erop groeit
- ( Indeling op basis van SELECTIVITEIT
Algemeen medium
, Selectief medium )
1.3. Enten van voedingsmedia
- Enten = initiële hoeveelheid cellen van het gewenste micro-organisme
aanbrengen op medium
- Enten van vloeibare media
Suspensie aangemaakt van gewenste micro-organisme en hiervan
klein volume naar vloeibare medium
- Enten van vaste media
met entnaald/ oognaald: kolonies opgepikt van medium en
uitgestreken op nieuw groeimedium flamberen!! = steriliseren
entnaald
Streepenting
o Opkweken of onderhouden van een celcultuur
o Zigzag patron
Enting tot reincultuur
o Afzonderlijke, zuivere kolonies verkrijgen
o Celstructuur stelselmatig verdund over oppervlak petriplaat
Strijkplaat
o Cellen gespreid over volledige agaroppervlak
o Mbv Drigalski spatel
Gietplaat
o Enting gebeurt voor medium gestold is
o Na autoclaveren inoculum in medium gebracht en geschud
zodat cellen homogeen verdeeld worden
o Cellen verspreiden zowel binnenin als bovenop agarmedium
1.4. Microscopie
- In practicum: klaarveld lichtmicroscoop 3 lenzensysteem
- 3 lenzen
Condensor
o Licht opvangen en focussen op preparaat
Objectief
o Vangen getransmitteerde lichtbundel op en zorgen voor
beeldvorming en beeldvergroting
Oculair
o Vangen licht van objectieflenzen op, focussen het licht en
zorgen voor laatste beeldvergroting
- Totale vergroting = vergroting objectieflens x vergroting oculairlens
- Oplossend vermogen/ resolving power = kleinste afstand waarop 2 punten
van elkaar moeten liggen zodat ze nog afzonderlijk en scherp kunnen
gezien worden
- Resolutie = het vermogen om 2 kleine en dicht bij elkaar liggende objecten
van elkaar te onderscheiden
Bepaald door golflengte van lichtbron + numerieke apertuur van de
lens + brekingsindex van medium waardoor licht passeert
o Brekingsindex lucht (1) is lager dan glas (1,55) waardoor het
licht afgebogen wordt en een deel van de lichtstralen de
objectieflens niet zal bereiken oplossing: immersieolie
(brekingsindex 1,55)
