BIOTECHNOLOGIE
BIO-INFORMATICA
SAMENVATTING LEERPAD
JOELLE LANGENDRIES
HOGENT – BMLT
2024-2025
, INTRODUCTIEVIDEO
Serial cloner à gebruiken we niet meer
IN SILICO CLONING
Cloneren = het maken van een genetische kopie van een organisme
Ligasen = enzymen die DNA-strengen aan elkaar verbinden door de fosfodiësterbindingen tussen
nucleotiden te vormen
Restricitie enzymen = enzymen die specifieke DNA-sequenties herkennen en knippen, wat ze nuttig
maakt voor genetische manipulatie
MCS = multiple cloning sites
Insert = stuk DNA dat in een plasmide wordt geplaatst tijdens genetische manipulatie
Plasmide = kleine, circulaire DNA-moleculen die vaak in bacteriën worden gevonden en dienen als
vectoren voor het transport van genen
à Inserts en plasmiden kunnen worden geconstrueerd in laboratoria door technieken zoals
restrictie-enzym knippen en ligeren
DOEL kloneren: expressiecinstruct maken (eiwit, DNA/RNA) à om te onderzoeken
Insert (voor in vector te steken)
- Celkweek HEK cellen
- RNA-extractie
- cDNA-bereiding
- PCR
AANMAKEN MT INSERT
MT = methallothionine
- Via PCR op cDNA met primers die complementair zijn met MT (forward en reverse)
- Aan uiteinde van primers hangt een niet-complementaire sequentie (= palindroom: Hind III en
EcoRI) en bescherming (3 basen)
A = adapter ; A + MID = artificieel stukje
BIO-INFORMATICA
SAMENVATTING LEERPAD
JOELLE LANGENDRIES
HOGENT – BMLT
2024-2025
, INTRODUCTIEVIDEO
Serial cloner à gebruiken we niet meer
IN SILICO CLONING
Cloneren = het maken van een genetische kopie van een organisme
Ligasen = enzymen die DNA-strengen aan elkaar verbinden door de fosfodiësterbindingen tussen
nucleotiden te vormen
Restricitie enzymen = enzymen die specifieke DNA-sequenties herkennen en knippen, wat ze nuttig
maakt voor genetische manipulatie
MCS = multiple cloning sites
Insert = stuk DNA dat in een plasmide wordt geplaatst tijdens genetische manipulatie
Plasmide = kleine, circulaire DNA-moleculen die vaak in bacteriën worden gevonden en dienen als
vectoren voor het transport van genen
à Inserts en plasmiden kunnen worden geconstrueerd in laboratoria door technieken zoals
restrictie-enzym knippen en ligeren
DOEL kloneren: expressiecinstruct maken (eiwit, DNA/RNA) à om te onderzoeken
Insert (voor in vector te steken)
- Celkweek HEK cellen
- RNA-extractie
- cDNA-bereiding
- PCR
AANMAKEN MT INSERT
MT = methallothionine
- Via PCR op cDNA met primers die complementair zijn met MT (forward en reverse)
- Aan uiteinde van primers hangt een niet-complementaire sequentie (= palindroom: Hind III en
EcoRI) en bescherming (3 basen)
A = adapter ; A + MID = artificieel stukje
