Practica histologie
1.Histotechnieken: van biopt tot gekleurde
weefselcoupe
Doel: bewerken van histologische prelevementen (biopten) ten behoeve
van lichtmicroscopisch onderzoek
1.1. Inleiding
Behandeling om structuren waaruit weefsel of cel bestaat kunnen
differentiëren
Bestanddelen dienen vastgelegd te worden
Morfologische cellulaire structuren dienen behouden te blijven
1.2. Fixatie
1.2.1. Doel
Verschillende chemische bestanddelen + morfologische cellulaire
structuren behouden
1.2.2. Effecten
Preventie van autolyse en putrefractie
Lyse van cellen door enzymatische activiteit tgv ruptuur
lysosomen
Afbraak van weefsel tgv bacteriële activiteit, gepaard met
gasformatie
Behouden cellen en weefselbestandedelen in zo getrouw
mogelijke toestand
Harden van weefsel (manipulatie natuurlijk weke weefsels
mogelijk)
Stijgen brekingsindex componenten zodat het beter
waargenomen wordt
Beïnvloeding kleurtechnieken meer selectieve kleuring
1.2.3. Soorten fixatieven
Formaldehyde - In water oplosbaar gas
- Commercieel als formol (40%)
- Meest gebruikt (10%)
- Geïncorporeerd in andere fixatieven
- Door oxidatie ontstaat verzuring met
vorming storende formolpigment
toevoegen fosfaatbuffer
Ethylalcohol - Weinig nut (uitgez. Bloeduitstrijkjes)
- Penetreert traag verharding na lange tijd
- Combinatie met carnoy’s vloeistof versnelt
, - Ethanol denatureert EW, precipiteert
glycogeen en lost vetten op
Aceton - Analoog ethanol
- Glycogeen niet goed bewaard
- Niet routinematig gebruikt
Combinatie van fixatieven:
Alcoholische - Formol 10 ml
formol - 90% alcohol 90 ml
- Fixatie polysacchariden
- Volledig na 6-8 uur
Carnoy’s - 100% alcohol 60 ml
vloeistof - Chloroform 30 ml
- Azijnzuur 10 ml
- Snelle penetratie
- Goede nucleaire fixatie met preservatie
RER en glycogeen
- Veroorzaakt krimping en vernietigd
cytoplasmatische elementen
- Volledig 1-2 uur of 15 min
1.3. Weefselbewerking
1.3.1. Inleiding
Snijdbaar maken voor microtoom
Doordrengen met stof die stevige consistentie geeft
Inbedding en impregnatie met gelatine biopsiefragmenten
zoals bot
Inbedding en impregnatie met paraffine als regel voor
lichtmicroscopie
Inbedding in plasticsoorten (harsen) nog harder, nog fijner
snijden
1.3.2. Paraffine inbedding
Voorafgegaan door 2 stappen
1. Dehydratatie
Water uit weefsel halen
Dmv alcohol reeks
Serie baden met stijgende alcohol concentraties
(anders te veel krimping)
2. Clearing
Intermediaire vloeistof die mengbaar is met
paraffine en alcohol
Ethanol vervangen door derde vloeistof
Weefselfragment wordt transparant
Chloroform: duurt lang
Benzeen: toxisch
Tolueen en xyleen: kleine fragmenten 30-60 min,
grotere 2-4 uur
vervangmiddel neoclear
1.Histotechnieken: van biopt tot gekleurde
weefselcoupe
Doel: bewerken van histologische prelevementen (biopten) ten behoeve
van lichtmicroscopisch onderzoek
1.1. Inleiding
Behandeling om structuren waaruit weefsel of cel bestaat kunnen
differentiëren
Bestanddelen dienen vastgelegd te worden
Morfologische cellulaire structuren dienen behouden te blijven
1.2. Fixatie
1.2.1. Doel
Verschillende chemische bestanddelen + morfologische cellulaire
structuren behouden
1.2.2. Effecten
Preventie van autolyse en putrefractie
Lyse van cellen door enzymatische activiteit tgv ruptuur
lysosomen
Afbraak van weefsel tgv bacteriële activiteit, gepaard met
gasformatie
Behouden cellen en weefselbestandedelen in zo getrouw
mogelijke toestand
Harden van weefsel (manipulatie natuurlijk weke weefsels
mogelijk)
Stijgen brekingsindex componenten zodat het beter
waargenomen wordt
Beïnvloeding kleurtechnieken meer selectieve kleuring
1.2.3. Soorten fixatieven
Formaldehyde - In water oplosbaar gas
- Commercieel als formol (40%)
- Meest gebruikt (10%)
- Geïncorporeerd in andere fixatieven
- Door oxidatie ontstaat verzuring met
vorming storende formolpigment
toevoegen fosfaatbuffer
Ethylalcohol - Weinig nut (uitgez. Bloeduitstrijkjes)
- Penetreert traag verharding na lange tijd
- Combinatie met carnoy’s vloeistof versnelt
, - Ethanol denatureert EW, precipiteert
glycogeen en lost vetten op
Aceton - Analoog ethanol
- Glycogeen niet goed bewaard
- Niet routinematig gebruikt
Combinatie van fixatieven:
Alcoholische - Formol 10 ml
formol - 90% alcohol 90 ml
- Fixatie polysacchariden
- Volledig na 6-8 uur
Carnoy’s - 100% alcohol 60 ml
vloeistof - Chloroform 30 ml
- Azijnzuur 10 ml
- Snelle penetratie
- Goede nucleaire fixatie met preservatie
RER en glycogeen
- Veroorzaakt krimping en vernietigd
cytoplasmatische elementen
- Volledig 1-2 uur of 15 min
1.3. Weefselbewerking
1.3.1. Inleiding
Snijdbaar maken voor microtoom
Doordrengen met stof die stevige consistentie geeft
Inbedding en impregnatie met gelatine biopsiefragmenten
zoals bot
Inbedding en impregnatie met paraffine als regel voor
lichtmicroscopie
Inbedding in plasticsoorten (harsen) nog harder, nog fijner
snijden
1.3.2. Paraffine inbedding
Voorafgegaan door 2 stappen
1. Dehydratatie
Water uit weefsel halen
Dmv alcohol reeks
Serie baden met stijgende alcohol concentraties
(anders te veel krimping)
2. Clearing
Intermediaire vloeistof die mengbaar is met
paraffine en alcohol
Ethanol vervangen door derde vloeistof
Weefselfragment wordt transparant
Chloroform: duurt lang
Benzeen: toxisch
Tolueen en xyleen: kleine fragmenten 30-60 min,
grotere 2-4 uur
vervangmiddel neoclear
