ELISA = enzyme-inked immunosorbent assay
Een biochemische test die antilichamen en enzym-gemedieerde kleurveranderingen gebruikt om de
aanwezigheid van ofwel antigenen (eiwitten, peptiden, hormonen) of antilichamen in een bepaald
monster te detecteren
Hoge gevoeligheid en een sterke specificiteit: gebruikt zeer specifieke antilichaam-antigeenreacties
Biologische moleculen detecteren a.d.h.v. enzym-gelabelde antigenen en antilichamen
1) Antigenen in 96 well-plaat
2) Primair antilichaam (specifiek capture-antilichaam) toevoegen bindt aan het antigeen
3) Secundair antilichaam (enzym-gekoppeld detectie-antilichaam) toevoegen bindt aan primair
antilichaam
4) Chromogene substraten toevoegen geeft zichtbare kleurverandering geeft aanwezigheid
antigeen aan
5) Kleurintensiteit kwantitatief of kwalitatief meten om aanwezige hoeveelheid antigeen te identificeren
Blokkering
Coating/capture Toevoegen
irrelevante eiwitten Probing/detectie Signaalmeting
Immobilisatie
of andere molecule Incubatie met het Detectie signaal via
antilichaam of
om onverzadigde gelabelde antigeen galebelde antigeen
antigeen op
oppervlaktebinding of antilichaam of antilichaam
oppervlak welletjes
splaatsen te
bedekken
1
, Voordelen Nadelen
Snel: gebruikt enkel antilichaam Inflexibel en duur: prim. Antilichaam moet
afzonderlijk gelabeld worden en kan niet voor
Elimineert kruisactiviteit tussen antilichamen
meerdere experimenten gebruikt worden
Signaal is minder versterkt
Meestal gebruikt voor analyse van de immuunrespons op een antigeen
Voordelen Nadelen
Hoge gevoeligheid: prim. antilichaam heeft Kruisreacties met sec. antilichaam mogelijk
verschillende epitopen die gebonden kunnen
Heeft extra incubatiestappen nodig
worden door meerdere sec. antilichamen
signaal versterkt
Flexibel: verschillende prim. detectie-antilichamen
kunnen worden gebruikt met een gelabeld sec.
antilichaam
Veel variaties van gelabelde sec. antilichamen zijn
verkrijgbaar
Meestal gebruikt voor bepaling van de totale antilichaamconcentratie in het monster
Voordelen Nadelen
Zeer hoge gevoeligheid: 2 antilichamen gebruikt Bij elkaar passend paar is vereist: optimalisatie
zodat het antigeen specifiek wordt opgevangen en van antilichaamcombinaties kan moeilijk zijn. Elk
gedetecteerd. Antigeen hoeft voor de meting niet antilichaam moet reageren met een specifiek
te worden gezuiverd epitoop op het doeleiwit en kan niet kruisreageren
met zijn partnerantilichaam
Flexibiliteit: zowel indirecte als directe detectie
mogelijk
Meestal gebruikt voor het analyseren van complexe monsters. We hoeven het antigeen niet te zuiveren
voordat we deze methode gebruiken.
Voordelen Nadelen
Hoge gevoeligheid: kan specifieke antigenen in Vals positief: lage specificiteit
kleine hoeveelheid detecteren
Vereist geen monsterverwerking
Grote precisie, nauwkeurigheid en
reproduceerbaarheid
2
Een biochemische test die antilichamen en enzym-gemedieerde kleurveranderingen gebruikt om de
aanwezigheid van ofwel antigenen (eiwitten, peptiden, hormonen) of antilichamen in een bepaald
monster te detecteren
Hoge gevoeligheid en een sterke specificiteit: gebruikt zeer specifieke antilichaam-antigeenreacties
Biologische moleculen detecteren a.d.h.v. enzym-gelabelde antigenen en antilichamen
1) Antigenen in 96 well-plaat
2) Primair antilichaam (specifiek capture-antilichaam) toevoegen bindt aan het antigeen
3) Secundair antilichaam (enzym-gekoppeld detectie-antilichaam) toevoegen bindt aan primair
antilichaam
4) Chromogene substraten toevoegen geeft zichtbare kleurverandering geeft aanwezigheid
antigeen aan
5) Kleurintensiteit kwantitatief of kwalitatief meten om aanwezige hoeveelheid antigeen te identificeren
Blokkering
Coating/capture Toevoegen
irrelevante eiwitten Probing/detectie Signaalmeting
Immobilisatie
of andere molecule Incubatie met het Detectie signaal via
antilichaam of
om onverzadigde gelabelde antigeen galebelde antigeen
antigeen op
oppervlaktebinding of antilichaam of antilichaam
oppervlak welletjes
splaatsen te
bedekken
1
, Voordelen Nadelen
Snel: gebruikt enkel antilichaam Inflexibel en duur: prim. Antilichaam moet
afzonderlijk gelabeld worden en kan niet voor
Elimineert kruisactiviteit tussen antilichamen
meerdere experimenten gebruikt worden
Signaal is minder versterkt
Meestal gebruikt voor analyse van de immuunrespons op een antigeen
Voordelen Nadelen
Hoge gevoeligheid: prim. antilichaam heeft Kruisreacties met sec. antilichaam mogelijk
verschillende epitopen die gebonden kunnen
Heeft extra incubatiestappen nodig
worden door meerdere sec. antilichamen
signaal versterkt
Flexibel: verschillende prim. detectie-antilichamen
kunnen worden gebruikt met een gelabeld sec.
antilichaam
Veel variaties van gelabelde sec. antilichamen zijn
verkrijgbaar
Meestal gebruikt voor bepaling van de totale antilichaamconcentratie in het monster
Voordelen Nadelen
Zeer hoge gevoeligheid: 2 antilichamen gebruikt Bij elkaar passend paar is vereist: optimalisatie
zodat het antigeen specifiek wordt opgevangen en van antilichaamcombinaties kan moeilijk zijn. Elk
gedetecteerd. Antigeen hoeft voor de meting niet antilichaam moet reageren met een specifiek
te worden gezuiverd epitoop op het doeleiwit en kan niet kruisreageren
met zijn partnerantilichaam
Flexibiliteit: zowel indirecte als directe detectie
mogelijk
Meestal gebruikt voor het analyseren van complexe monsters. We hoeven het antigeen niet te zuiveren
voordat we deze methode gebruiken.
Voordelen Nadelen
Hoge gevoeligheid: kan specifieke antigenen in Vals positief: lage specificiteit
kleine hoeveelheid detecteren
Vereist geen monsterverwerking
Grote precisie, nauwkeurigheid en
reproduceerbaarheid
2
