Samenvatting Applied Chromatography & Sample Handling
Inhoudsopgave
Chromatography in Bioanalysis ............................................................................................................... 2
Les 1: Introduction to Bioanalysis; UHPLC in Bioanalysis .................................................................... 2
Les 2: Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography (HILIC) ........................................................... 5
Les 3: Separation Methods in Bioanalysis ........................................................................................... 7
Les 4: Chiral Chromatography ............................................................................................................. 9
Les 5: (Immuno) Affinity Chromatography ........................................................................................ 12
Les 6: Multi Dimensional Liquid Chromatography in Bioanalysis ..................................................... 16
Sample Preparation in Bioanalysis ........................................................................................................ 19
Les 1A: Samples in Bioanalysis and Introduction in Sample Preparation ......................................... 19
Les 1B: Liquid Liquid Extraction (LLE) ................................................................................................ 21
Les 2: Liquid Phase Micro Extraction (LPME) .................................................................................... 23
Les 3: Solid Phase Micro Extractions (SPME)..................................................................................... 25
Workshop: Solid Phase Extraction (SPE) ........................................................................................... 27
, Chromatography in Bioanalysis
Les 1: Introduction to Bioanalysis; UHPLC in Bioanalysis
Bioanalyse
Chemische analyse van farmaceutische stoffen in biologische monsters. Het doel van de chemische
analyse is het identificeren en kwantificeren van farmaceutische producten in biologische monsters.
Voor identificatie wordt de exacte chemische identiteit bepaald en voor kwantificatie wordt de
concentratie analyt in het monster bepaald.
Uitvoeren bioanalyse
- Laboratoriums in de farmaceutische industrie. Medicijn ontwikkeling bestaat uit drie
fases:
1. Drug discovery fase
2. Preclinical discovery fase. Evaluatie van de veiligheid van de stof uit de drug
discovery.
3. Clinical discovery fase. Testen voor efficiëntie en veiligheid, en data opstellen
voor registratie en marketing.
- Laboratoriums in ziekenhuizen.
- Laboratoriums voor forensisch onderzoek.
- Laboratoriums voor doping controle.
Physicoschemische eigenschappen
Om de gevoeligheid van de meting te optimaliseren is kennis nodig van de chemische eigenschappen
van het analyt.
- Protolytische eigenschappen analyt. Analyten kunnen voorkomen in een geladen of
neutrale vorm. De ionisatie heeft veel invloed op de eigenschappen van het molecuul. De
pH heeft invloed op de hoeveelheid ionisatie:
pH-pKa>2: 99% geïoniseerd. pH-pKa<-2: <1% geïoniseerd. pH=pKa: 50% geïoniseerd.
- Partitie van stoffen tussen fasen.
- Stereochemie. Chiral, R en S enantiomeren, actieve vorm.
- Peptides en eiwitten.
LC analyse
LC wordt het vaakst gebruikt voor de analyse van farmaceutische componenten. GC en CE worden
gebruikt als LC niet gebruikt kan worden, bijvoorbeeld voor vluchtige oplossingen en enantiomeren.
Door de grote variëteit in moleculen worden er verschillende LC technieken gebruikt:
- RPLC
- NPLC (HILIC)
- SEC
- IE
- Affiniteitschromatografie
- Ligand exchange chromatografie
- HIC
- Chirale chromatografie
- Voorbereidende chromatografie
2
Inhoudsopgave
Chromatography in Bioanalysis ............................................................................................................... 2
Les 1: Introduction to Bioanalysis; UHPLC in Bioanalysis .................................................................... 2
Les 2: Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography (HILIC) ........................................................... 5
Les 3: Separation Methods in Bioanalysis ........................................................................................... 7
Les 4: Chiral Chromatography ............................................................................................................. 9
Les 5: (Immuno) Affinity Chromatography ........................................................................................ 12
Les 6: Multi Dimensional Liquid Chromatography in Bioanalysis ..................................................... 16
Sample Preparation in Bioanalysis ........................................................................................................ 19
Les 1A: Samples in Bioanalysis and Introduction in Sample Preparation ......................................... 19
Les 1B: Liquid Liquid Extraction (LLE) ................................................................................................ 21
Les 2: Liquid Phase Micro Extraction (LPME) .................................................................................... 23
Les 3: Solid Phase Micro Extractions (SPME)..................................................................................... 25
Workshop: Solid Phase Extraction (SPE) ........................................................................................... 27
, Chromatography in Bioanalysis
Les 1: Introduction to Bioanalysis; UHPLC in Bioanalysis
Bioanalyse
Chemische analyse van farmaceutische stoffen in biologische monsters. Het doel van de chemische
analyse is het identificeren en kwantificeren van farmaceutische producten in biologische monsters.
Voor identificatie wordt de exacte chemische identiteit bepaald en voor kwantificatie wordt de
concentratie analyt in het monster bepaald.
Uitvoeren bioanalyse
- Laboratoriums in de farmaceutische industrie. Medicijn ontwikkeling bestaat uit drie
fases:
1. Drug discovery fase
2. Preclinical discovery fase. Evaluatie van de veiligheid van de stof uit de drug
discovery.
3. Clinical discovery fase. Testen voor efficiëntie en veiligheid, en data opstellen
voor registratie en marketing.
- Laboratoriums in ziekenhuizen.
- Laboratoriums voor forensisch onderzoek.
- Laboratoriums voor doping controle.
Physicoschemische eigenschappen
Om de gevoeligheid van de meting te optimaliseren is kennis nodig van de chemische eigenschappen
van het analyt.
- Protolytische eigenschappen analyt. Analyten kunnen voorkomen in een geladen of
neutrale vorm. De ionisatie heeft veel invloed op de eigenschappen van het molecuul. De
pH heeft invloed op de hoeveelheid ionisatie:
pH-pKa>2: 99% geïoniseerd. pH-pKa<-2: <1% geïoniseerd. pH=pKa: 50% geïoniseerd.
- Partitie van stoffen tussen fasen.
- Stereochemie. Chiral, R en S enantiomeren, actieve vorm.
- Peptides en eiwitten.
LC analyse
LC wordt het vaakst gebruikt voor de analyse van farmaceutische componenten. GC en CE worden
gebruikt als LC niet gebruikt kan worden, bijvoorbeeld voor vluchtige oplossingen en enantiomeren.
Door de grote variëteit in moleculen worden er verschillende LC technieken gebruikt:
- RPLC
- NPLC (HILIC)
- SEC
- IE
- Affiniteitschromatografie
- Ligand exchange chromatografie
- HIC
- Chirale chromatografie
- Voorbereidende chromatografie
2
