Samenvatting - Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1: hoofdstuk 6

Hoofdstuk 6 Elementaire Basistechnieken
1.6.1 Pipetteren
Pipetteren = vloeistof opzuigen in een pipet en nauwkeurig gewenst volume overbrengen
naar een ander recipiënt.
 Volumetrische pipet (Volumepipet, Volpipet)
 Afmeten van 1 bepaald volume
 Gegradueerde pipet (Maatpipet)
 Schaalverdeling op pipet => meerdere volumes mogelijk
 Pasteurpipet
 Niet-geijkt
 Druppelaar: paar druppeltjes overbreng (niet zo nauwkeurig)
 Micropipet
De werking van een micropipet:

Een micropipet heeft een zuiger (piston) kan bewegen in een schacht.

De plastic wegwerptip die op de pipet geplaatst wordt vormt het verlengde van de pipetschacht.

1. Bij het induwen van de zuiger tot aan de eerste weestand wordt het ingestelde volume lucht
uit de pipetschacht en aansluitende pipettip geduwd.

2. Vervolgens wordt de pipettip in de te pipetteren vloeistof geplaatst en wordt de zuiger
langzaam losgelaten.

 Hierbij wordt er een vacuüm gecreëerd waardoor het ingestelde volume vloeistof
aangezogen wordt in de pipettip.

1. Hierna wordt de pipet overgebracht naar het recipiënt waarin er gepipetteerd moet worden.

2. De zuiger wordt vervolgens ingeduwd tot voorbij de eerste weerstand (tot aan de tweede
weestand), zodat het volledige volume vloeistof in het gewenste recipiënt terecht komt.

,In de praktijk worden verschillende micropipetten gebruikt:
Het min. volume is het volume dat je met de
pipet nauwkeurig kan meten.
Je gaat 10 micrometer niet meten met en
100 micrometer pipet. Want het
foutenmarge is hier groot. Men moet dus
kijken naar hoe groot het foutenmarge gaat
zijn om te weten met welke pipet men gaat
moeten meten.
Het min. volume kennen!
Het volume wordt van boven naar onder gelezen.




Pipetteren is één van de belangrijkste bronnen van fouten en kruiscontaminatie (=
onafhankelijke stalen worden met elkaar vermengd)

, Oorzaken van fouten:
1. Beperkte precisie van het instrument:

 Afhankelijk van het gepipetteerd volume (10 micrometer niet met een 100
micrometer pipet meten)
 Kalibratie: om te zien dat het pipet nog nauwkeurig is.
 Zelf water pipetteren en wegen
 2 ml met de pipet nemen en zien hoeveel het op de
weegschaal weegt.
 Weegschaal moet ook gekalibreerd worden.
 Firma zal deze kalibraties nauwkeurig uitvoeren: certificaat (ISO
normen) behalen.
1. Omgevingsfactoren

 Temperatuur (proberen constant te houden) -> kan invloed hebben op
vloeistoffen.
 Luchtvochtigheid (probleem beperken door vloeistof enkele malen vooraf op
te pipetteren).
1. De onderzoeker

 Foute instelling
 Onnauwkeurig en te snel pipetteren
 Onoplettendheid


Hoe ontstaat een kruiscontaminatie?
Een zuiger beweegt in een luchtkamer waardoor tussen de zuiger en de vloeistof in de tip is
er een luchtkussen.
Uit de vloeistof die men pipetteert kunnen er bepaalde deeltjes in een aerosol terecht
komen. Deze kan zich vastzetten in een pipet. Bij de volgende pipetering van een staal zullen
die loskomen en via aerosol terug in een volgend staal terecht komen.