COLORATION DE GRAM
Cristal violet (30s) -> Lugol (30s) -> Alcool 95°C (10s) -> Safranine (20s)
Gram - : rose / Gram+ : violet
Les étapes 1 et 2 colorent en violet le contenu de la bactérie. Le violet de gentiane se fixe sur les composants
cytoplasmiques de toutes les bactéries. Le Lugol permet de fixer cette coloration interne.
L'étape 3 (alcool) sert à décolorer le cytoplasme des bactéries qui seront dites « Gram négatives ». En effet,
celles-ci ont une paroi pauvre en peptidoglycanes - donc plus fine - qui va laisser passer l'alcool (molécule
hydrophile) ou le mélange alcool-acétone, et qui décolorera le cytoplasme en éliminant le violet de gentiane.
Au contraire, pour les bactéries dites « Gram positif » la paroi constitue une barrière imperméable à l'alcool car
elle est composée d'une « couche » de peptidoglycanes plus importante. La paroi est de ce fait plus épaisse. Les
bactéries resteront alors de couleur violette.
L'étape 4 est une contre-coloration ayant pour but de donner aux bactéries Gram négatives précédemment
décolorées une teinte rose permettant de les visualiser au microscope. Les bactéries à Gram positif restées
violettes seront évidemment insensibles à cette contre-coloration plus pâle que le violet imprégnant leur
cytoplasme.
ISOLEMENT
- Colonie S (Smooth = lisse) : bombée, surface lisse, brillante, bords réguliers, crémeuse, susp homo
- Colonie R (Rough= rugueux) : plate, rugueuse, mate, bords irréguliers, susp hétérogène
- Colonie M (Muqueux) : bombée, lisse, brillante, consistance filante, susp hétérogènes
CATALASE / OXYDASE
Catalase : lors de l’ajout du peroxyde d’hydrogène (H 2O2), on observe la formation de bulle. Notre
souche possède donc la catalase où lors de l’ajout de H 2O2 , en mécanisme de défense contre cette
molécule toxique, va le transformer en eau (H 2O) et en dioxygène (O2). Elle est donc Catalase+.
Oxydase : lors de l’ajout de notre souche sur la bandelette, on observe l’absence de tache violette.
Cela signifie que notre souche n’est pas capable d’oxyder les dérives N-méthylés du paraphénylène ce
qui démontre l’absence de cytochrome C en fin de chaîne de respiratoire. Notre souche est donc
Oxydase-.
TYPE RESPIRATOIRE
Pour vérifier le type respiratoire de notre souche, on l’ensemence dans un long tube rempli de Milieu Viande-
Foie possédant un gradient en oxygène du plus élevée (haut du tube) à son absence (bout du tube). Après
incubation, on observe que notre souche a poussée à pousser sur toute la hauteur du tube. On peut donc en
conclure que notre culture supporte l’oxygène mais aussi son absence, elle est donc aérobie-anaérobie
facultative.
Cristal violet (30s) -> Lugol (30s) -> Alcool 95°C (10s) -> Safranine (20s)
Gram - : rose / Gram+ : violet
Les étapes 1 et 2 colorent en violet le contenu de la bactérie. Le violet de gentiane se fixe sur les composants
cytoplasmiques de toutes les bactéries. Le Lugol permet de fixer cette coloration interne.
L'étape 3 (alcool) sert à décolorer le cytoplasme des bactéries qui seront dites « Gram négatives ». En effet,
celles-ci ont une paroi pauvre en peptidoglycanes - donc plus fine - qui va laisser passer l'alcool (molécule
hydrophile) ou le mélange alcool-acétone, et qui décolorera le cytoplasme en éliminant le violet de gentiane.
Au contraire, pour les bactéries dites « Gram positif » la paroi constitue une barrière imperméable à l'alcool car
elle est composée d'une « couche » de peptidoglycanes plus importante. La paroi est de ce fait plus épaisse. Les
bactéries resteront alors de couleur violette.
L'étape 4 est une contre-coloration ayant pour but de donner aux bactéries Gram négatives précédemment
décolorées une teinte rose permettant de les visualiser au microscope. Les bactéries à Gram positif restées
violettes seront évidemment insensibles à cette contre-coloration plus pâle que le violet imprégnant leur
cytoplasme.
ISOLEMENT
- Colonie S (Smooth = lisse) : bombée, surface lisse, brillante, bords réguliers, crémeuse, susp homo
- Colonie R (Rough= rugueux) : plate, rugueuse, mate, bords irréguliers, susp hétérogène
- Colonie M (Muqueux) : bombée, lisse, brillante, consistance filante, susp hétérogènes
CATALASE / OXYDASE
Catalase : lors de l’ajout du peroxyde d’hydrogène (H 2O2), on observe la formation de bulle. Notre
souche possède donc la catalase où lors de l’ajout de H 2O2 , en mécanisme de défense contre cette
molécule toxique, va le transformer en eau (H 2O) et en dioxygène (O2). Elle est donc Catalase+.
Oxydase : lors de l’ajout de notre souche sur la bandelette, on observe l’absence de tache violette.
Cela signifie que notre souche n’est pas capable d’oxyder les dérives N-méthylés du paraphénylène ce
qui démontre l’absence de cytochrome C en fin de chaîne de respiratoire. Notre souche est donc
Oxydase-.
TYPE RESPIRATOIRE
Pour vérifier le type respiratoire de notre souche, on l’ensemence dans un long tube rempli de Milieu Viande-
Foie possédant un gradient en oxygène du plus élevée (haut du tube) à son absence (bout du tube). Après
incubation, on observe que notre souche a poussée à pousser sur toute la hauteur du tube. On peut donc en
conclure que notre culture supporte l’oxygène mais aussi son absence, elle est donc aérobie-anaérobie
facultative.
