Samenvatting H3 prof.Baes

Isolatie van celorganellen
 Meest toegepast op leverweefsel (rat, muis) omdat men van een ±homogene populatie van
hepatocyten kan vertrekken
 Belangrijk om opzuivering organellen te documenteren door bv. analyseren van merkerenzym
waarvan gekend is dat het selectief in een bepaald organel te vinden is
o Mitochondriën: cytochroom c
o Peroxisomen: catalase
o Lysosomen: zuur fosfatase

1. Plasmamembraan wordt gebroken door mixer, ultrasonen of homogenisator  homogenaat
(op ijs uitgevoerd om afbraak eiwitten te voorkomen)
2. Differentiële centrifugatie
 800 g: kernen
 15 000 g: mitochondriën, lysosomen en peroxisomen
 100 000 g: plasmamembraan, microsomale fractie en polyribosomen
 300 000 g: ribosomale subunits
3. Densitietsgradiëntcentrifugatie : cellulaire componenten worden gescheiden op basis van hun
densiteit
 Gradiënt van niet-ionische substantie (glycerol, sucrose)
 2 principes:
 Centrifugeren gedurende beperkte tijd (zwaardere partikels zakken sneller)
 Centrifugeren gedurende meerdere uren (ieder partikel op eigen densiteit)
4. Immunologische technieken (verdere opzuivering of alternatieve methode)
 Selectief afzonderen van organellen adhv antistoffen tegen eiwitten in membraan
 Bv. antistoffen op magnetische korrels  in contact brengen met organelsuspensie 
magneet trekt de antistoffen terug aan  organellen afgezonderd

, H3: Transport en metabolisme van
lipiden
Lipiden:

 Noodzakelijk:
o Energiebron
o Membranen opbouwen
o Signaalmoleculen
 Weinig oplosbaar in waterig milieu cel  meeste te vinden in membranen
 Slechts in bepaalde cellen opgestapeld als triglyceriden
 Meer gekend over intercellulair transport dan intracellulair transport

Cel kan pas vergroten als er genoeg membranen zijn.

Membranen:

 Bestaan uit eiwitten en lipiden
 Ontstaan enkel door expansie bestaande membranen (1e stappen biosynthese in cytoplasma,
latere in associatie met membranen)


1 LIPIDENTRANSPORT IN DE CEL

1.1 LOCALISATIE VAN LIPIDENSYNTHESE
Synthese vetzuren

 C16 vetzuren en korter: acetyl-CoA in cytosol
 C18 en langer: elongases in ER
 Desaturases: maken onverzadigde bindingen in ER
 Polyonverzadigde vetzuren: kunnen door mens niet gemaakt worden  opgenomen in dieet,
verlengd en gedesatureerd in ER

Vrije vetzuren

 Gebonden aan vetzuurbindende eiwitten voor transport
 Extracellulair milieu: albumine meest voorkomend
 Intracellulair: Fatty Acid Binding Proteins

Meeste vetzuren worden veresterd in triglyceriden, fosfolipiden, sfingolipiden en cholesterolesters.