Moleculaire biologie
2e Ba BMW Prof. Dr. Guy Van Camp
Zelfstudie Opdracht: Belangrijkste DNA technologieën
Tabel 1: Technieken voor genetische analyse
Technieken Procedures Voordelen Nadelen Toepassingen
Southern DNA wordt met restrictie-enzymen Specifieke DNA-sequentie Agarose gel is moeilijk om Aan-/afwezigheid van
blotting gesplitst zoeken in bloed- of mee te werken specifieke nucleotiden
Fragmenten verzameld op weefselsample (Heel fragiele gel) sequenties in DNA
agarose gel bepalen
Elektroforese scheidt verder Gebruik van probes Denaturatie nodig (Voornamelijk
(op basis van grootte) -> indien groot genoom zijn vergelijkingen maken)
o Kleinere fragmenten er heel veel probes nodig Zeer oude techniek en niet
migreren sneller en dus heel veel southern mogelijk voor het hele Klein stukje van
DNA wordt van fragiele gel naar nylon blotting genoom genoom controleren
filter (identieke posities) -> niet mogelijk voor grote
Toevoegen van radioactieve probe1 schaal
Bindt aan complementaire
DNA-segmenten
Niet gebonden probes kunnen
weggewassen worden
X-ray film over nylon filter gelegd voor
localiseren van probes
-> autoradiograaf gevormd
Northern RNA uit cellen of weefsels wordt -Onthult de grootte van Zeer oude en ingewikkelde Gelijkaardige studie als
blotting gedenatureerd door gebruik van mRNA gecodeerd door gen techniek Southern blotting, maar
gelelektroforese Celactivteit tijdens meer voor RNA
Buffer heeft invloed op de ontwikkeling, in Gebruikt om niveau van
secundaire structuur van RNA verschillende cellen van een celactiviteit te bepalen
organisme, in (niet-)
kankercellen of voor en na
blootstelling aan stimuli
-Geen denaturatie nodig
1
Deel DNA of RNA overeenkomend met een gen of seguentie dat complementair bindt aan zijn overeenkomstige deel
, Moleculaire biologie
2e Ba BMW Prof. Dr. Guy Van Camp
Procedures Voordelen Nadelen Toepassingen
DNA- Plasmide opgebouwd uit drie sectoren Maakt genoomprojecten Vergt veel werk en tijd Aanmaken van DNA-
klonering 1. Kloning site: waar sequentie kan mogelijk Niet te gebruiken voor bibliotheken
ingebouwd worden snelle parallelle Isoleren van specifieke
2. Ampicilline-resistatie site amplificaties DNA-sequenties uit een
3. Replication origin complexe mix van
Restrictie-enzymes gebruikt om sequenties Intronen moeten verschillende DNA-
in te bouwen in plasmide verwijdert worden sequenties
EcoRI klieft sequentie in zowel
DNA-sequentie als plasmide Sommige menselijke
-> identieke zones verkregen eiwitten zijn te groot
o Kunnen hybridiseren met voor bacteriën om aan te
elkaar maken
DNA-ligase bindt de uiteinden van
plasmide DNA aan die van DNA-
sequentie
-> recombinante plasmide
gevormd
E.coli bacterie wordt behandeld met CaCl2
Permeabel gemaakt voor DNA-
moleculen
Transformatieproces treedt op
Sommige E.coli nemen plasmiden
op, anderen niet
Gastcellen op agarplaat brengen met
antibacteriële ampicilline
Cellen zonder plasmiden sterven,
andere repliceren
o Vorming van kolonies
o Replicatie mbv
gastcelenzymen
2e Ba BMW Prof. Dr. Guy Van Camp
Zelfstudie Opdracht: Belangrijkste DNA technologieën
Tabel 1: Technieken voor genetische analyse
Technieken Procedures Voordelen Nadelen Toepassingen
Southern DNA wordt met restrictie-enzymen Specifieke DNA-sequentie Agarose gel is moeilijk om Aan-/afwezigheid van
blotting gesplitst zoeken in bloed- of mee te werken specifieke nucleotiden
Fragmenten verzameld op weefselsample (Heel fragiele gel) sequenties in DNA
agarose gel bepalen
Elektroforese scheidt verder Gebruik van probes Denaturatie nodig (Voornamelijk
(op basis van grootte) -> indien groot genoom zijn vergelijkingen maken)
o Kleinere fragmenten er heel veel probes nodig Zeer oude techniek en niet
migreren sneller en dus heel veel southern mogelijk voor het hele Klein stukje van
DNA wordt van fragiele gel naar nylon blotting genoom genoom controleren
filter (identieke posities) -> niet mogelijk voor grote
Toevoegen van radioactieve probe1 schaal
Bindt aan complementaire
DNA-segmenten
Niet gebonden probes kunnen
weggewassen worden
X-ray film over nylon filter gelegd voor
localiseren van probes
-> autoradiograaf gevormd
Northern RNA uit cellen of weefsels wordt -Onthult de grootte van Zeer oude en ingewikkelde Gelijkaardige studie als
blotting gedenatureerd door gebruik van mRNA gecodeerd door gen techniek Southern blotting, maar
gelelektroforese Celactivteit tijdens meer voor RNA
Buffer heeft invloed op de ontwikkeling, in Gebruikt om niveau van
secundaire structuur van RNA verschillende cellen van een celactiviteit te bepalen
organisme, in (niet-)
kankercellen of voor en na
blootstelling aan stimuli
-Geen denaturatie nodig
1
Deel DNA of RNA overeenkomend met een gen of seguentie dat complementair bindt aan zijn overeenkomstige deel
, Moleculaire biologie
2e Ba BMW Prof. Dr. Guy Van Camp
Procedures Voordelen Nadelen Toepassingen
DNA- Plasmide opgebouwd uit drie sectoren Maakt genoomprojecten Vergt veel werk en tijd Aanmaken van DNA-
klonering 1. Kloning site: waar sequentie kan mogelijk Niet te gebruiken voor bibliotheken
ingebouwd worden snelle parallelle Isoleren van specifieke
2. Ampicilline-resistatie site amplificaties DNA-sequenties uit een
3. Replication origin complexe mix van
Restrictie-enzymes gebruikt om sequenties Intronen moeten verschillende DNA-
in te bouwen in plasmide verwijdert worden sequenties
EcoRI klieft sequentie in zowel
DNA-sequentie als plasmide Sommige menselijke
-> identieke zones verkregen eiwitten zijn te groot
o Kunnen hybridiseren met voor bacteriën om aan te
elkaar maken
DNA-ligase bindt de uiteinden van
plasmide DNA aan die van DNA-
sequentie
-> recombinante plasmide
gevormd
E.coli bacterie wordt behandeld met CaCl2
Permeabel gemaakt voor DNA-
moleculen
Transformatieproces treedt op
Sommige E.coli nemen plasmiden
op, anderen niet
Gastcellen op agarplaat brengen met
antibacteriële ampicilline
Cellen zonder plasmiden sterven,
andere repliceren
o Vorming van kolonies
o Replicatie mbv
gastcelenzymen
