Immunologie WZ
WERKZITTING 1
Werkzitting 1 (26/2/2026)
Hoe kunnen humane monocyten/macrofagen na infectie bij een patiënt de
antimicrobiële respons versterken door de neutrofiele granulocyten aan te
trekken om de infectie te bestrijden?
monocyten opzuiveren uit bloed
antistollingsmiddel toevoegen
minder stolling door buffers zonder calcium / magnesium te gebruiken
kleine fractie, dus opzuiveren
alternatieven:
kankercellijn
muis (in vivo, dus eerst in vitro!)
kunnen differentiëren naar macrofagen of dendrieten ⇒ presentatie van
antigenen aan T-cellen ⇒ immuunrespons
opzuiveren
densiteit centrifugatie
flow cytometrie
te duur + duurt te lang
magnetische beads met antilichaam specifiek voor monocyt
vb: CD14 = positieve selectie
negatieve selectie: antistoffen tegen andere alle cellen ⇒
monocyten afnemen
duurder want meer antistoffen
bloed centrifugeren
Plasma
bevat rode bloedplaatjes
Immunologie WZ 1
, WBC
40-50%: RBC
witte bloedcellen mogen nooit aan een patiënt worden gegeven
RBC en plasma wel
buffy coat bestellen bij rode kruis
WBC en bloedplaatjes → wordt niet aan patiënten gegeven
ook nog beetje RBC en plasma (veilige marge)
centrifugeren
onderaan RBC + granulocyten
witte band: PBMC’s = peripherial blood mononuclear cells
monocyten en lymfocyten
micro-organismen gebruiken om te testen of de monocyten erop reageren
→ ontstekingsreactie ingang
bacterien, virussen, schimmels
niet te veel → cel dood
L2 labo
bij L1 labo: microgene componenten die niet infecteus zijn gebruiken
ook een LPS van gram – bacteriën of peptidoglycaan van gram + bacteriën
of synthetisch dubbelstrengig RNA nodig als vervanging van een micro-
organisme. Je zet de monocyten op een well-plaat en voegt het dsRNA/
LPS/ peptidoglycaan.
⇒ zuivere cellen op 24 well plaat
groeimedium toevoegen
CO2 incubator ⇒ pH stabiel houden, zodat de cellen niet afsterven
1-2 dagen incuberen, zodat de cellen moleculen kunnen aanmaken
Immunologie WZ 2
, Het volgende dat je wilt weten is wat zal de monocyten aantrekken en via
welke methoden kan je dit te weten komen?
moleculen die granulocyten aantrekken: chemokines
concentratie IL-8/CXCL8 meten
detecteren met western blot of ELISA
indirect ELISA
veel andere eiwitten in medium
andere eiwitten bezetten plastic, anti gen weinig kans
niet ideaal
sandwich ELISA
plaats specifiek maken voor eiwit → de andere spelen geen rol
goed
competitief
moeilijker maar kan ook
POLYKLONAAL
proefdieren immuniseren
konijn
Bloed nemen
Dier laten leven
Een maand later opnieuw Ag inspuiten
Twee weken later opnieuw bloed afnemen
Ab verkrijgen
Ideaal voor langdurige aanmaak van Ab
Een proefdier of persoon wordt 1 of meerdere keren geïmmuniseerd
met Ag
Immunologie WZ 3
, Adjuvantia (alum, CFA, poly I:C) kunnen gebruikt worden samen
met Ag
Om sterkere respons te krijgen
MONOCLONAAL
⇒ hybridomas
Monoklonale Ab aanmaken:
Een monoklonale antistof is het product van 1 enkele gestimuleerde
B cel
Fusie van de B-cel en een onsterfelijke myeloma cel
HAT medium wordt gebruikt voor de selectie van de gefusioneerde
cellen
Productie van massale hoeveelheden van single-specifieke Ab
Monoklonale Ab zijn zeer specifiek
Weinig cross-reactie
Aanmaak via:
Hybridomas maken:
Immunisatie van proefdier
Extraheren van B-cellen uit de milt van muis
Fusie van myeloma cellen met B-cellen
Nu nog steeds polyklonale cellen
Individuele klonen maken
Verdunnen tot je maar 1 cel hebt
Van deze cel kunnen we oneindig veel kweken
multiplex ELISA
voor elke antistof andere kleur bead
staal erop → bindt aan specifieke soort bead
secundaire antistof erop die tegen eiwit reageert
Immunologie WZ 4
WERKZITTING 1
Werkzitting 1 (26/2/2026)
Hoe kunnen humane monocyten/macrofagen na infectie bij een patiënt de
antimicrobiële respons versterken door de neutrofiele granulocyten aan te
trekken om de infectie te bestrijden?
monocyten opzuiveren uit bloed
antistollingsmiddel toevoegen
minder stolling door buffers zonder calcium / magnesium te gebruiken
kleine fractie, dus opzuiveren
alternatieven:
kankercellijn
muis (in vivo, dus eerst in vitro!)
kunnen differentiëren naar macrofagen of dendrieten ⇒ presentatie van
antigenen aan T-cellen ⇒ immuunrespons
opzuiveren
densiteit centrifugatie
flow cytometrie
te duur + duurt te lang
magnetische beads met antilichaam specifiek voor monocyt
vb: CD14 = positieve selectie
negatieve selectie: antistoffen tegen andere alle cellen ⇒
monocyten afnemen
duurder want meer antistoffen
bloed centrifugeren
Plasma
bevat rode bloedplaatjes
Immunologie WZ 1
, WBC
40-50%: RBC
witte bloedcellen mogen nooit aan een patiënt worden gegeven
RBC en plasma wel
buffy coat bestellen bij rode kruis
WBC en bloedplaatjes → wordt niet aan patiënten gegeven
ook nog beetje RBC en plasma (veilige marge)
centrifugeren
onderaan RBC + granulocyten
witte band: PBMC’s = peripherial blood mononuclear cells
monocyten en lymfocyten
micro-organismen gebruiken om te testen of de monocyten erop reageren
→ ontstekingsreactie ingang
bacterien, virussen, schimmels
niet te veel → cel dood
L2 labo
bij L1 labo: microgene componenten die niet infecteus zijn gebruiken
ook een LPS van gram – bacteriën of peptidoglycaan van gram + bacteriën
of synthetisch dubbelstrengig RNA nodig als vervanging van een micro-
organisme. Je zet de monocyten op een well-plaat en voegt het dsRNA/
LPS/ peptidoglycaan.
⇒ zuivere cellen op 24 well plaat
groeimedium toevoegen
CO2 incubator ⇒ pH stabiel houden, zodat de cellen niet afsterven
1-2 dagen incuberen, zodat de cellen moleculen kunnen aanmaken
Immunologie WZ 2
, Het volgende dat je wilt weten is wat zal de monocyten aantrekken en via
welke methoden kan je dit te weten komen?
moleculen die granulocyten aantrekken: chemokines
concentratie IL-8/CXCL8 meten
detecteren met western blot of ELISA
indirect ELISA
veel andere eiwitten in medium
andere eiwitten bezetten plastic, anti gen weinig kans
niet ideaal
sandwich ELISA
plaats specifiek maken voor eiwit → de andere spelen geen rol
goed
competitief
moeilijker maar kan ook
POLYKLONAAL
proefdieren immuniseren
konijn
Bloed nemen
Dier laten leven
Een maand later opnieuw Ag inspuiten
Twee weken later opnieuw bloed afnemen
Ab verkrijgen
Ideaal voor langdurige aanmaak van Ab
Een proefdier of persoon wordt 1 of meerdere keren geïmmuniseerd
met Ag
Immunologie WZ 3
, Adjuvantia (alum, CFA, poly I:C) kunnen gebruikt worden samen
met Ag
Om sterkere respons te krijgen
MONOCLONAAL
⇒ hybridomas
Monoklonale Ab aanmaken:
Een monoklonale antistof is het product van 1 enkele gestimuleerde
B cel
Fusie van de B-cel en een onsterfelijke myeloma cel
HAT medium wordt gebruikt voor de selectie van de gefusioneerde
cellen
Productie van massale hoeveelheden van single-specifieke Ab
Monoklonale Ab zijn zeer specifiek
Weinig cross-reactie
Aanmaak via:
Hybridomas maken:
Immunisatie van proefdier
Extraheren van B-cellen uit de milt van muis
Fusie van myeloma cellen met B-cellen
Nu nog steeds polyklonale cellen
Individuele klonen maken
Verdunnen tot je maar 1 cel hebt
Van deze cel kunnen we oneindig veel kweken
multiplex ELISA
voor elke antistof andere kleur bead
staal erop → bindt aan specifieke soort bead
secundaire antistof erop die tegen eiwit reageert
Immunologie WZ 4
