Kleuring
Gramkleuring
Basische kleurstof is kristalviolet (komt in
cytoplasma van cel). Lugol (I2/KI) zorgt dat de
kleur blijft zitten.
Ontkleuren met ethanol. Paarse kleur blijft bij
gram-pos.
Contrastkleurstof is fuchsine of safranine, tegenkleuring voor gram-neg roze kleur.
Ziehl-Neelsen-kleuring
Voor zuurvaste bacteriën (rode kleur).
Kleuren met fuchsine ontkleuren
tegenkleuren met een zure methyleenblauw
oplossing.
Auraminekleuring
Zuurvaste kleuring. Kleuren met auramine oplossing
ontkleuren met zure alcohol tegenkleuren met
methyleenblauw.
Giemsakleuring
Gebruikt voor opsporen van parasieten in bloed (Plasmodium,
Leishmania, Trypanosoma)
Calcofluorkleuring
Voor fungi en opsporen van Pneumocystis carinii.
Uitvoering:
- uitstrijkpreparaat (gefixeerd met methanol)
- 2 min: calcofluorkleuring (reagens A) en spoelen
- tegenkleuren met reagens B
- UV-microscopie
- resultaat: geel-groene organismen (op rood-oranje achtergrond)
, Voedingsbodems
Universele vaste/bloeibare voedingsbodems
Bloedagar (BA)
Bestaat uit een basisbodem : Columbia agar, Tryptic Soy Agar (TSA), Blood agar base, Mueller Hinton
Agar.
Na sterilisatie en afkoeling tot 56°C word 5% bloed (paardenbloed) toegevoegd.
De bodem maakt een onderscheid tussen bacteriën die RBC kunnen lyseren en die die het niet kunnen.
- Alpha-hemolyse: groene kleur. Bij Viridans streptokokken, Streptococcus pneumoniae
- Beta-hemolyse: heldere zone. Bij Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus-stammen
- Gamma-hemolyse: (geen hemolyse). E. coli.
Brain Heart Infusion (BHI)
Met hersenweefsel of hartweefsel van varkens
Chocolade-agar
Bevat gelyseerde RBC. Gebruikt bij fastidious organismen, organismen die extra groeifactoren nodig
hebben (Haemophilus influenzae, Neisseriae spp.).
Autoclaveren van basisbodem afkoelen tot 56°C en 5% bloed toevoegen. Daarna terug verwarmen tot
85°C, daardoor lyseren RBC. De X-factor (hemin) en V-factor (NAD+) fungeren als groeifactoren, zorgt
voor bruine kleur.
Universele vloeibare VB
Zoals thioglycollaat bouillon of Tryptic Soy Broth (TSB).
Wordt gebruikt wanneer er een laag aantal pathogenen in staal zitten. Snelle vermenigvuldiging, daarna
overgeënt op een bodem afzonderlijke reinculturen.
Thioglycollaat medium: groei van anaeroben.
Gramkleuring
Basische kleurstof is kristalviolet (komt in
cytoplasma van cel). Lugol (I2/KI) zorgt dat de
kleur blijft zitten.
Ontkleuren met ethanol. Paarse kleur blijft bij
gram-pos.
Contrastkleurstof is fuchsine of safranine, tegenkleuring voor gram-neg roze kleur.
Ziehl-Neelsen-kleuring
Voor zuurvaste bacteriën (rode kleur).
Kleuren met fuchsine ontkleuren
tegenkleuren met een zure methyleenblauw
oplossing.
Auraminekleuring
Zuurvaste kleuring. Kleuren met auramine oplossing
ontkleuren met zure alcohol tegenkleuren met
methyleenblauw.
Giemsakleuring
Gebruikt voor opsporen van parasieten in bloed (Plasmodium,
Leishmania, Trypanosoma)
Calcofluorkleuring
Voor fungi en opsporen van Pneumocystis carinii.
Uitvoering:
- uitstrijkpreparaat (gefixeerd met methanol)
- 2 min: calcofluorkleuring (reagens A) en spoelen
- tegenkleuren met reagens B
- UV-microscopie
- resultaat: geel-groene organismen (op rood-oranje achtergrond)
, Voedingsbodems
Universele vaste/bloeibare voedingsbodems
Bloedagar (BA)
Bestaat uit een basisbodem : Columbia agar, Tryptic Soy Agar (TSA), Blood agar base, Mueller Hinton
Agar.
Na sterilisatie en afkoeling tot 56°C word 5% bloed (paardenbloed) toegevoegd.
De bodem maakt een onderscheid tussen bacteriën die RBC kunnen lyseren en die die het niet kunnen.
- Alpha-hemolyse: groene kleur. Bij Viridans streptokokken, Streptococcus pneumoniae
- Beta-hemolyse: heldere zone. Bij Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus-stammen
- Gamma-hemolyse: (geen hemolyse). E. coli.
Brain Heart Infusion (BHI)
Met hersenweefsel of hartweefsel van varkens
Chocolade-agar
Bevat gelyseerde RBC. Gebruikt bij fastidious organismen, organismen die extra groeifactoren nodig
hebben (Haemophilus influenzae, Neisseriae spp.).
Autoclaveren van basisbodem afkoelen tot 56°C en 5% bloed toevoegen. Daarna terug verwarmen tot
85°C, daardoor lyseren RBC. De X-factor (hemin) en V-factor (NAD+) fungeren als groeifactoren, zorgt
voor bruine kleur.
Universele vloeibare VB
Zoals thioglycollaat bouillon of Tryptic Soy Broth (TSB).
Wordt gebruikt wanneer er een laag aantal pathogenen in staal zitten. Snelle vermenigvuldiging, daarna
overgeënt op een bodem afzonderlijke reinculturen.
Thioglycollaat medium: groei van anaeroben.
