HC6: Diagnostiek van infectieziekten
Diagnostiek
Ideale diagnostische test?
“Gouden standaard” benadert 100% sensitiviteit en specificiteit
Sample keuze
Waar zit de pathogeen in het lichaam: pathogenese, levenscyclus (sample nemen voor diagnose)
Norovirus - darminfectie → sample?
Coronavirus - luchtweginfectie → sample?
Varkenslintworm: Taenia Solium
Welke sample moet je nemen om cysticercosis te diagnosticeren?
Diagnostiek van infectieziekten
1: Pathogeen
Micro- (macro) scopisch detectie van pathogeen
2: Pathogeen-producten
DNA, RNA detectie
Antigenen, toxines
3: Antilichamen detectie tegen pathogeen (infectie)
,1: Pathogeen - microscopie
Kleuring malariaparasiet
Welke soort lintworm: Taenia solium of Taenia saginata?
Microscopie - specificiteit kan een probleem zijn
Voordeel:
• Snel, indien kweken niet nodig is
• Wellicht andere pathogenen detecteren
Nadeel:
• Getrand ‘oog’ nodig
• Hoeveel samples per dag?
• Sensitiviteit (kan een probleem zijn)
• Specificiteit (kan een probleem zijn)
2: Pathogeenproducten
DNA, RNA detectie
→ polymerase chain reaction (PCR)
Conventionele PCR - exponentiële amplificatie van DNA fragment
,2: Pathogeenproducten - PCR
2: Pathogeenproducten - conventionale PCR
Conventionele PCR uitslag: wel of niet geïnfecteerd
2: Pathogeenproducten - reverse transcriptase PCR (TC-PCR)
Conventionale PCR: exponentiële amplificatie van RNA fragment via cDNA met Reverse Transcriptase
(RT)
2: Pathogeenproducten - Real-time PCR: quantificeren infectie
Quantificeren van ‘input’ DNA of RNA
• Fluorofoor (fluorescentie moleculen)
• Fluorescentie intensiteit correleert met hoeveelheid PCR product
• Fluorescentie intensiteit gemeten na elke cyclus
, Diagnostiek van infectieziekten
2: Pathogeenproducten
DNA, RNA detectie
antigenen, toxines detectie
2: Pathogeenproducten - ELISA
Antigenen, toxines detectie
Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA)
Productie detectie-antilichamen
Diagnostiek
Ideale diagnostische test?
“Gouden standaard” benadert 100% sensitiviteit en specificiteit
Sample keuze
Waar zit de pathogeen in het lichaam: pathogenese, levenscyclus (sample nemen voor diagnose)
Norovirus - darminfectie → sample?
Coronavirus - luchtweginfectie → sample?
Varkenslintworm: Taenia Solium
Welke sample moet je nemen om cysticercosis te diagnosticeren?
Diagnostiek van infectieziekten
1: Pathogeen
Micro- (macro) scopisch detectie van pathogeen
2: Pathogeen-producten
DNA, RNA detectie
Antigenen, toxines
3: Antilichamen detectie tegen pathogeen (infectie)
,1: Pathogeen - microscopie
Kleuring malariaparasiet
Welke soort lintworm: Taenia solium of Taenia saginata?
Microscopie - specificiteit kan een probleem zijn
Voordeel:
• Snel, indien kweken niet nodig is
• Wellicht andere pathogenen detecteren
Nadeel:
• Getrand ‘oog’ nodig
• Hoeveel samples per dag?
• Sensitiviteit (kan een probleem zijn)
• Specificiteit (kan een probleem zijn)
2: Pathogeenproducten
DNA, RNA detectie
→ polymerase chain reaction (PCR)
Conventionele PCR - exponentiële amplificatie van DNA fragment
,2: Pathogeenproducten - PCR
2: Pathogeenproducten - conventionale PCR
Conventionele PCR uitslag: wel of niet geïnfecteerd
2: Pathogeenproducten - reverse transcriptase PCR (TC-PCR)
Conventionale PCR: exponentiële amplificatie van RNA fragment via cDNA met Reverse Transcriptase
(RT)
2: Pathogeenproducten - Real-time PCR: quantificeren infectie
Quantificeren van ‘input’ DNA of RNA
• Fluorofoor (fluorescentie moleculen)
• Fluorescentie intensiteit correleert met hoeveelheid PCR product
• Fluorescentie intensiteit gemeten na elke cyclus
, Diagnostiek van infectieziekten
2: Pathogeenproducten
DNA, RNA detectie
antigenen, toxines detectie
2: Pathogeenproducten - ELISA
Antigenen, toxines detectie
Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA)
Productie detectie-antilichamen
