Practicum 5&6: Leverhomogenaat LDH en GDH
Door Rosa Wassenaar (6093345) en Michelle Weesie (6157904) – groep 9 & 10
27 maart 2018 – Assisententen Lisa en Dorien
Voorbereidingsvragen
Ingeleverd op papier.
* Toevoeging antwoord vraag 6:
Onder (gedurende een tijd) niet gevoede omstandigheden maakt de lever glucose. Glucose
kan gemaakt worden uit pyruvaat dat uit lactaat gemaakt kan worden (LDH). De
reactierichting is dan van lactaat à pryuvaat en NAD+ wordt geoxideerd tot NADH + H+. Er
wordt door GDH glutamaat omgezet tot a-ketoglutaraat en hierbij wordt NAD+ geoxideerd.
a-ketoglutaraat is een intermediair van de Krebs-cyclus, hierdoor kan energie vrijgemaakt
worden.
Berekeningen ΔA/min, latentie en recovery
Berekening ΔA/min:
ΔA/min wordt eerst berekend per seconde en daarna omgerekend naar per minuut:
ΔA/min wordt voor PNS, Cyt en Mit voor + en – Triton op de volgende manier berekend:
𝐴(90) − 𝐴(15)
∆𝐴/ min = ∙ 60
75 𝑠
Zie ΔA/min berekening op ingeleverde papier
Berekening latentie%:
Latentie is het deel van de totale enzymactiviteit dat niet zichtbaar is. Op het formulier in de
bijlage is het latentie% als volgt berekend:
ΔA ΔA
met Triton − min zonder Triton
𝐿𝑎𝑡𝑒𝑛𝑡𝑖𝑒% = min
ΔA
min met Triton
Berekening recovery%:
De recovery is ten opzichte van PNS. De recovery is het % enzymactiviteit in een bepaald
compartiment. Op het formulier in de bijlage is het recovery% als volgt berekend:
ΔA
min in bepaalde fractie (+Triton)
𝑅𝑒𝑐𝑜𝑣𝑒𝑟𝑦% =
ΔA
min in PNS (+Triton)
, LDH: Lactaat-dehydrogenase
Absorptie bij 340 nm van LDH
Gemiddelde absorptiewaarden:
PNS Cyt Mit
A340 nm - Triton + Triton - Triton + Triton - Triton + Triton
15 s 1,812 1,232 1,082 1,056 1,550 1,316
30 s 1,460 0,914 0,707 0,772 1,549 1,304
45 s 1,184 0,674 0,455 0,512 1,548 1,287
60 s 1,027 0,513 0,343 0,348 1,545 1,270
75 s 0,975 0,431 0,302 0,249 1,542 1,256
90 s 0,961 0,396 0,294 0,209 1,541 1,240
ΔA/min van LDH:
PNS Cyt Mit
- Triton + Triton - Triton + Triton - Triton + Triton
-0,681 -0,669 -0,630 -0,678 -0,007 -0,061
Grafiek 1: A340 LDH in verschillende celfracties
2,000
1,900
1,800
1,700
1,600
1,500
1,400
1,300 PNS - Triton
1,200 PNS + Triton
1,100
Cyt - Triton
A340
1,000
Cyt + Triton
0,900
0,800 Mit - Triton
0,700 Mit + Triton
0,600 Lineair (Mit - Triton)
0,500 Lineair (Mit + Triton)
0,400
0,300
0,200
0,100
0,000
15 30 45 60 75 90
Tijd (seconden)
Grafiek 1: Absorptie van cytosolisch enzym LDH bij 340 nm in verschillende fractie
Door Rosa Wassenaar (6093345) en Michelle Weesie (6157904) – groep 9 & 10
27 maart 2018 – Assisententen Lisa en Dorien
Voorbereidingsvragen
Ingeleverd op papier.
* Toevoeging antwoord vraag 6:
Onder (gedurende een tijd) niet gevoede omstandigheden maakt de lever glucose. Glucose
kan gemaakt worden uit pyruvaat dat uit lactaat gemaakt kan worden (LDH). De
reactierichting is dan van lactaat à pryuvaat en NAD+ wordt geoxideerd tot NADH + H+. Er
wordt door GDH glutamaat omgezet tot a-ketoglutaraat en hierbij wordt NAD+ geoxideerd.
a-ketoglutaraat is een intermediair van de Krebs-cyclus, hierdoor kan energie vrijgemaakt
worden.
Berekeningen ΔA/min, latentie en recovery
Berekening ΔA/min:
ΔA/min wordt eerst berekend per seconde en daarna omgerekend naar per minuut:
ΔA/min wordt voor PNS, Cyt en Mit voor + en – Triton op de volgende manier berekend:
𝐴(90) − 𝐴(15)
∆𝐴/ min = ∙ 60
75 𝑠
Zie ΔA/min berekening op ingeleverde papier
Berekening latentie%:
Latentie is het deel van de totale enzymactiviteit dat niet zichtbaar is. Op het formulier in de
bijlage is het latentie% als volgt berekend:
ΔA ΔA
met Triton − min zonder Triton
𝐿𝑎𝑡𝑒𝑛𝑡𝑖𝑒% = min
ΔA
min met Triton
Berekening recovery%:
De recovery is ten opzichte van PNS. De recovery is het % enzymactiviteit in een bepaald
compartiment. Op het formulier in de bijlage is het recovery% als volgt berekend:
ΔA
min in bepaalde fractie (+Triton)
𝑅𝑒𝑐𝑜𝑣𝑒𝑟𝑦% =
ΔA
min in PNS (+Triton)
, LDH: Lactaat-dehydrogenase
Absorptie bij 340 nm van LDH
Gemiddelde absorptiewaarden:
PNS Cyt Mit
A340 nm - Triton + Triton - Triton + Triton - Triton + Triton
15 s 1,812 1,232 1,082 1,056 1,550 1,316
30 s 1,460 0,914 0,707 0,772 1,549 1,304
45 s 1,184 0,674 0,455 0,512 1,548 1,287
60 s 1,027 0,513 0,343 0,348 1,545 1,270
75 s 0,975 0,431 0,302 0,249 1,542 1,256
90 s 0,961 0,396 0,294 0,209 1,541 1,240
ΔA/min van LDH:
PNS Cyt Mit
- Triton + Triton - Triton + Triton - Triton + Triton
-0,681 -0,669 -0,630 -0,678 -0,007 -0,061
Grafiek 1: A340 LDH in verschillende celfracties
2,000
1,900
1,800
1,700
1,600
1,500
1,400
1,300 PNS - Triton
1,200 PNS + Triton
1,100
Cyt - Triton
A340
1,000
Cyt + Triton
0,900
0,800 Mit - Triton
0,700 Mit + Triton
0,600 Lineair (Mit - Triton)
0,500 Lineair (Mit + Triton)
0,400
0,300
0,200
0,100
0,000
15 30 45 60 75 90
Tijd (seconden)
Grafiek 1: Absorptie van cytosolisch enzym LDH bij 340 nm in verschillende fractie
