Stuvia-samenvatting-laboratory-tools.pdf

Samenvatting
Laboratory Tools
Basisbegrippen voor scheidingsmethode
Het proces van chromatografie is driedelige compromis

 Het scheiden
 Tijd
 Volume

Chromatografie is een scheidingstechniek waarmee een mengsel van stoffen gescheiden kan worden
in individuele componenten.
De stoffen worden gescheiden op basis van verschillen in eigenschappen:

 Moleculaire grootte
 Grootte
 Vorm
 Lading
 Oplosbaarheid
 absorptie
 Vluchtigheid

De essentiële componenten van chromografie zijn:

 Een stationaire fase; Een vaste stof of vloeibaar, gel of een geïmmobiliseerde vloeistof
vastgehouden door een ondersteunende matrix. (stoffen met een hoge affiniteit voor de
stationaire fase komen vertraagd in de kolom. Stoffen reageren dus allemaal anders,
hierdoor in scheiding mogelijk).
 Een chromatografisch bed; De stationaire fase kan worden gepakt in een glazen of metalen
kolom
 Een mobiele fase; Een vloeistof of gas dat dient als een oplosmiddel die het monster draagt
door de stationaire fase en elueert van het chromatografisch bed.
 Een levering system; Het passeren van de mobiele fase door het chromatografisch bed
 Een detectie systeem; Het begeleiden van de test stoffen

In een chromatografisch systeem zullen de stoffen die sterk reageren met de
stationaire fase worden vertraagd, terwijl de stoffen die weinig tot niet reageren
sneller door de kolom zullen gaan wat leidt tot verschillen in afstand en in
elutietijd.

Chromatografische systemen kunnen worden ingedeeld op basis van het
chromatografisch bed, de substantie van de mobiele en stationaire fase en de
methode van het scheiden.

Verschil tussen preparatief en analytische is dat bij preparatief het is voorbewerkt
en bij analytische het gaat om het eindproduct

, 1.Dunne laag chromatografie (TLC) en papier chromatografie
Bij TLC worden de monsters toegevoegd aan een kant
van het papier door microsyringe of microcapillary. Dit
papier wordt volledig gedroogd en dan overgebracht
naar een glazen bak met een ondiepe laag oplosmiddel
(giftig). Het papier wordt verwijder als het oplosmiddel
ongeveer 80-90% heeft afgelegd.

Het is belangrijk dat in de chromatografie tank het
oplosmiddel 2 uur van te voren in evenwicht wordt
gebracht (pre-equilibrate). Om zo de omgeving te
verzadigen met damp.

De beweging van de stoffen kan worden uitgedrukt in
termen zoals;


Deze waardes zijn op te zoeken in tabellen.



Stationaire fase Mobiele fase Detectie
Dunne laag absorberend Beweegt over de stationaire fase Aankleuren, UV, radioactief
materiaal zoals: Silica gel door capillaire werking



2. Kolom chromatografie
Pak een glazen kolom met de geschikte stationaire fase en equilibreren van
de mobiele fase door de kolom te laten doorlopen met behulp van
zwaartekracht of met een lage druk peristaltische pomp. De onbekende
stof kan dan aangebracht worden aan de bovenkant van de kolom voor het
vormen van afzonderlijke banden. Dit wordt vervolgens gespoeld door de
kolom door de mobiele fase. Als de onbekend stof verschillende
eigenschappen bevat zal de stof scheiden en elueren op verschillende
tijden in de mobiele fase. De detectie wordt gedaan door substantie te
verzamelen in bijv. epjes van de mobiele fase als het elueert van de kolom
(discontinue controle) handmatig of met een automatische fractie
verzamelaar.
Dit kan geanalyseerd worden met een elutie profiel (of chromatogram).
Door het uitzetten van de hoeveelheid van de stof tegen de tijd,
elutievolume of fractie nummer. Dit moet een symmetrische piek geven
voor elke stof.

Een probleem bij alle kolomchromatografische scheidingen is diffusie, waardoor de banden breder
worden, dus scheiding (R) minder.
Bij hogere elutiesnelheid minder diffusie, dus betere scheiding. Daarom worden er vaak hoogdruk
pompen gebruikt, wat speciale eisen stelt aan het dragermateriaal: