Bespreek het enzym chymotrypsine.
Wat is het?
- Enzym: Serineprotease, hydrolase en endopeptidase
- Substraatspecifiek: Bevat specifieke reactieve serine (Ser195) in de actieve
site.
- Werkt in 2 stappen.
- DIPF is een organofosfaat dat de werking van serineproteasen, zoals
chymotrypsine, remt door zich te binden aan het actieve centrum van het
enzym.
Wat doet het?
- Serineprotease (hydrolase): Knipt peptidebindingen van eiwitten door solide
peptidebindingen te hydrolyseren (H₂O van 55M).
- Endopeptidase: Verbreekt interne peptidebindingen, geen eindstandige.
- Breekt voedsel en eiwitten af.
- Verlaagt de ΔE via covalente katalyse (via specifieke reactieve serine
(Ser195) in de actieve site) + zuur/base-reactie
- Hydrolyseert peptidebindingen aan de carboxylzijde van vooral aromatische
aminozuren (Trp, Tyr, Phe), soms ook Leu of Met. Werkt specifiek.
Waar zit het?
- Dunne darm
2-stapsmechanisme
1. Acylatie
Snelle stap
Omdat het enzym in de snelle acylatiestap direct het gele product vormt
en vrijgeeft.
, OG-groep van serine (hydroxylgroep (–OH) van de zijketen) voert
nucleofiele aanval uit op substraat en wordt tijdelijk covalent gebonden
met stuk van substraat (acylgroep) Acyl-enzym intermediair ontstaat.
2. Deacetylatie
Trage stap
H₂O Covalent gebonden acyl-enzym intermediair hydrolyseren
(afsplitsen) en het enzym regenereren.
Hydrolyse: Hydroxylgroep van Ser195 valt de peptidebinding aan, reactie
ondersteund door een (aanliggende) Asp-His-Ser-katalytische triade die
bestaat uit Ser195, histidine (His), en asparaginezuur (Asp).
Proton (H+) onttrokken aan de hydroxylgroep van Ser (H+-donor) door His
in de katalytische triade. (pkA H₂O voor verliezen van een H+ = 15,4.) O
van Ser wordt krachtig nucleofiel (alkoxixde (O- ) door nucleofiele aanval,
die de carbonylgroep van de peptidebinding in het substraat kan
aanvallen. His (H+-acceptor) kan dit doen omdat het gestabiliseerd wordt
door een H-brug met Asp-zuur.
- Burst-kinetiek:
Verklaart waarom de reactie begint met een snelle burst (acetylatie),
gevolgd door een vertraagde steady-state fase (deacetylatie) door een
beperkende stap zoals productafgifte.
Substraatanaloog gebruiken dat tijdens de enzymreactie een
kleurverandering ondergaat Enzymkinetiek volgen.
Standaardmethode om de werking en snelheid van enzymen te
bestuderen.
Spectroscoop
Je begint met 1 kleurloos substraat en eindigt met 2 kleurloze
reactieproducten.
Wat is het?
- Enzym: Serineprotease, hydrolase en endopeptidase
- Substraatspecifiek: Bevat specifieke reactieve serine (Ser195) in de actieve
site.
- Werkt in 2 stappen.
- DIPF is een organofosfaat dat de werking van serineproteasen, zoals
chymotrypsine, remt door zich te binden aan het actieve centrum van het
enzym.
Wat doet het?
- Serineprotease (hydrolase): Knipt peptidebindingen van eiwitten door solide
peptidebindingen te hydrolyseren (H₂O van 55M).
- Endopeptidase: Verbreekt interne peptidebindingen, geen eindstandige.
- Breekt voedsel en eiwitten af.
- Verlaagt de ΔE via covalente katalyse (via specifieke reactieve serine
(Ser195) in de actieve site) + zuur/base-reactie
- Hydrolyseert peptidebindingen aan de carboxylzijde van vooral aromatische
aminozuren (Trp, Tyr, Phe), soms ook Leu of Met. Werkt specifiek.
Waar zit het?
- Dunne darm
2-stapsmechanisme
1. Acylatie
Snelle stap
Omdat het enzym in de snelle acylatiestap direct het gele product vormt
en vrijgeeft.
, OG-groep van serine (hydroxylgroep (–OH) van de zijketen) voert
nucleofiele aanval uit op substraat en wordt tijdelijk covalent gebonden
met stuk van substraat (acylgroep) Acyl-enzym intermediair ontstaat.
2. Deacetylatie
Trage stap
H₂O Covalent gebonden acyl-enzym intermediair hydrolyseren
(afsplitsen) en het enzym regenereren.
Hydrolyse: Hydroxylgroep van Ser195 valt de peptidebinding aan, reactie
ondersteund door een (aanliggende) Asp-His-Ser-katalytische triade die
bestaat uit Ser195, histidine (His), en asparaginezuur (Asp).
Proton (H+) onttrokken aan de hydroxylgroep van Ser (H+-donor) door His
in de katalytische triade. (pkA H₂O voor verliezen van een H+ = 15,4.) O
van Ser wordt krachtig nucleofiel (alkoxixde (O- ) door nucleofiele aanval,
die de carbonylgroep van de peptidebinding in het substraat kan
aanvallen. His (H+-acceptor) kan dit doen omdat het gestabiliseerd wordt
door een H-brug met Asp-zuur.
- Burst-kinetiek:
Verklaart waarom de reactie begint met een snelle burst (acetylatie),
gevolgd door een vertraagde steady-state fase (deacetylatie) door een
beperkende stap zoals productafgifte.
Substraatanaloog gebruiken dat tijdens de enzymreactie een
kleurverandering ondergaat Enzymkinetiek volgen.
Standaardmethode om de werking en snelheid van enzymen te
bestuderen.
Spectroscoop
Je begint met 1 kleurloos substraat en eindigt met 2 kleurloze
reactieproducten.
