Hoofdstuk 4: Eiwitten
Bereiding van polyclonaal AL
Welke dier hangt af van:
- De hoeveelheid antistof dat je nodig hebt: Meer AL uit een geit dan muis
- De relatie tussen de donor en de antistof producent: Zie uitleg verder
Stel: Muiseiwit injecteren in een geit
● De geit zal het herkennen als lichaamsvreemd en een immuunreactie opstarten
● Hierdoor worden er antistoffen geproduceerd
Fase I PEPTIDE DESIGN: Antigeen wordt goed bestudeerd
● Kijken waar de epitopen liggen
● Vaak in silico
PEPTIDE SYNTHESIS
De peptide wordt aangemaakt (technieken van vorige les: Chemische synthese in
vitro, in brengen in een bacterie) om in te brengen in een dier
● De peptide moet zeer zuiver zijn
● Waarom is dit belangrijk dat de peptide zuiver is? Stel de peptide is niet
zuiver (met bacteriële contaminanten) en je injecteert het in een geit
, ● Dan zal het meer een immuunrespons hebben tegen de bacteriële
contaminanten dan voor het peptide zelf waarvoor we Antistoffen willen
opwekken.
● Dit willen we niet.
● Dit noemt Immuno dominantie
PEPTIDE CONJUGATION: Peptide gaan conjugeren aan een adjuvans.
● Adjuvans is een extra molecuul dat we er gaan aanhangen die ervoor
gaat zorgen dat het immuunsysteem meer getriggerd gaat worden om
antistoffen op te wekken
● Adjuvans zit ook in een vaccin om beter Antistoffen aan te maken
● = Om de immuunreactie nog sterker te maken zodanig er meer antistoffen
worden aangemaakt
Fase II ● Het konijn injecteren met het peptide
● We moeten het peptide een aantal keer injecteren in het konijn
● Figuur tijdslijn: Kijken of het konijn antilichaam produceert
● De injectie wordt vijf keer herhaald
● Meten en detecteren van antistoffen via? ELISA DETECTION
● Er wordt bloed afgenomen om te kijken of er genoeg antistoffen aanwezig
zijn tegen het peptide
Fase III ● Na ongeveer 70 dagen? Konijn dood maken om het serum in het lichaam
te kunnen halen
● En de antistoffen te kunnen opzuiveren
● Opzuiveren van Antistoffen kan via technieken als:
Affiniteitschromatografie
● Opnieuw een ELISA detectie doen om te kijken hoeveel antistoffen we
hebben kunnen opzuiveren
Fase IV ● Kijken hoe goed het antistof is dat we hebben opgezuiverd
, ● De succes rate: 60-75%
Monoclonale Antilichaam produceren: via Hybridoma
Stap 1: De muis wordt opnieuw geïmmuniseerd
● Een proefdier, meestal een muis, wordt geïnjecteerd met het specifieke antigeen
waarvoor je antistoffen wilt maken.
● Dit stimuleert het immuunsysteem van de muis om B-cellen te produceren die
specifieke antistoffen aanmaken tegen het antigeen.
Op antigeen: Verschillende epitopen (Kleuren)
Stap 2: Isoleren van B-cellen
- De milt wordt uit de muis gehaald: bevat B-cellen
- B-cellen maken antistoffen door contact met het antigen
Stap 3: Fusie met Myeloma cellen
- B-cellen kunnen niet lang in cultuur houden -> gaan snel dood
- Oplossing: fuseren met myeloma cellen (geïmmortaliseerde kankercelllijn) =
Ontstaan van hybridoma cellen
- De fusie is niet altijd efficiënt
- VANAF NU: Willen we enkel de efficiënte hybridomas in cultuur houden
Bereiding van polyclonaal AL
Welke dier hangt af van:
- De hoeveelheid antistof dat je nodig hebt: Meer AL uit een geit dan muis
- De relatie tussen de donor en de antistof producent: Zie uitleg verder
Stel: Muiseiwit injecteren in een geit
● De geit zal het herkennen als lichaamsvreemd en een immuunreactie opstarten
● Hierdoor worden er antistoffen geproduceerd
Fase I PEPTIDE DESIGN: Antigeen wordt goed bestudeerd
● Kijken waar de epitopen liggen
● Vaak in silico
PEPTIDE SYNTHESIS
De peptide wordt aangemaakt (technieken van vorige les: Chemische synthese in
vitro, in brengen in een bacterie) om in te brengen in een dier
● De peptide moet zeer zuiver zijn
● Waarom is dit belangrijk dat de peptide zuiver is? Stel de peptide is niet
zuiver (met bacteriële contaminanten) en je injecteert het in een geit
, ● Dan zal het meer een immuunrespons hebben tegen de bacteriële
contaminanten dan voor het peptide zelf waarvoor we Antistoffen willen
opwekken.
● Dit willen we niet.
● Dit noemt Immuno dominantie
PEPTIDE CONJUGATION: Peptide gaan conjugeren aan een adjuvans.
● Adjuvans is een extra molecuul dat we er gaan aanhangen die ervoor
gaat zorgen dat het immuunsysteem meer getriggerd gaat worden om
antistoffen op te wekken
● Adjuvans zit ook in een vaccin om beter Antistoffen aan te maken
● = Om de immuunreactie nog sterker te maken zodanig er meer antistoffen
worden aangemaakt
Fase II ● Het konijn injecteren met het peptide
● We moeten het peptide een aantal keer injecteren in het konijn
● Figuur tijdslijn: Kijken of het konijn antilichaam produceert
● De injectie wordt vijf keer herhaald
● Meten en detecteren van antistoffen via? ELISA DETECTION
● Er wordt bloed afgenomen om te kijken of er genoeg antistoffen aanwezig
zijn tegen het peptide
Fase III ● Na ongeveer 70 dagen? Konijn dood maken om het serum in het lichaam
te kunnen halen
● En de antistoffen te kunnen opzuiveren
● Opzuiveren van Antistoffen kan via technieken als:
Affiniteitschromatografie
● Opnieuw een ELISA detectie doen om te kijken hoeveel antistoffen we
hebben kunnen opzuiveren
Fase IV ● Kijken hoe goed het antistof is dat we hebben opgezuiverd
, ● De succes rate: 60-75%
Monoclonale Antilichaam produceren: via Hybridoma
Stap 1: De muis wordt opnieuw geïmmuniseerd
● Een proefdier, meestal een muis, wordt geïnjecteerd met het specifieke antigeen
waarvoor je antistoffen wilt maken.
● Dit stimuleert het immuunsysteem van de muis om B-cellen te produceren die
specifieke antistoffen aanmaken tegen het antigeen.
Op antigeen: Verschillende epitopen (Kleuren)
Stap 2: Isoleren van B-cellen
- De milt wordt uit de muis gehaald: bevat B-cellen
- B-cellen maken antistoffen door contact met het antigen
Stap 3: Fusie met Myeloma cellen
- B-cellen kunnen niet lang in cultuur houden -> gaan snel dood
- Oplossing: fuseren met myeloma cellen (geïmmortaliseerde kankercelllijn) =
Ontstaan van hybridoma cellen
- De fusie is niet altijd efficiënt
- VANAF NU: Willen we enkel de efficiënte hybridomas in cultuur houden
