Samenvatting chromatografie
Chromatography
Introduction
Tsvett: scheiden van plant pigmenten op filtreerpapier mbv petroleumether = principe van
chromatography
- Stationaire fase
niet mengbaar:
o Geïmobiliseerde op vaste drager of wand
verschillende interactie
o Selectief moleculen vertragen
analiet met beide fasen
- Mobiele fase
o Geforceerde beweging door sp
Scheidingsprincipe = verschil in affiniteit anamiet met mobiele fase vs stationaire fase
Retentie v/h analiet door de sp
- Partitie coëfficiënt K
- X(mobile) =X(stationair) (molfractie)
- K=Cs/Cm
Maw K>1 om een goede scheiding te krijgen
Physical separation
Doel: scheiding, identificatie, kwanitificatie
Adhv retentietijden vergelijken met
standaarden (niet 100%)
Thin-layer chromatography
- Snelle scan van de compositie -> gebruiken om ingewikkelde kolom te ontwikkelen
- Gebaseerd op polariteiten
samenstelling
- Sp:silicagel op alumina of cellulose
o Normal phase silica: polaire stationaire fase
o Reversed phase silica : apolair
- Mp:petroleum ether, heptane
Stappenplan
1) verdun de sample met vluchtig solvent
2) TLC plaatje met sample en standaarden
3) Plaats in mp
1
,Samenvatting chromatografie
4) Stop wanneer solvent top van het plaatje bereikt
Zichtbaar maken
resultaten
1) Uv-analyse
2) Ontwikkelen dlc met chemische reactie (thiolen -> zwarte puntjes)
Rf-waarde
Rf= x(analiet)/x(solvent)
Moelijk reproduceerbaard tgv
- Adsorberende laag
- Mp
- Activiteit sp
- T
- Hvh sample
- Damp evenwicht tussen tlc en labo
Kolom chromatografie
Setup
zand nodig om funneling te vookomen
=> level vloeistoffront voor optimale
scheiding
stappenplan
1) Vul de kolom met sp
2) Laat mp vloeien tot op hetzelfde
niveau
3) Breng sample aan
4) Run kolom en neem samples
5) Analyseer de fracties
Analyse v/d fracties
Scheiding is nooit perfect => snelheidsverdeling:klokcurve
2
, Samenvatting chromatografie
General theory
Partitie coëfficiënt (K)
K=Cs/Cm -> liefst lineair verloop
A) Adsorbtie-isotherm:Verzadiging van absortiesites -> lagere
concentratie de analyse uitvoeren
B) Dissociatieve evenwichten: sp=water en mp=benzene curve B
voor zwak zure oplossing
a. Niet gedissocieerde deeltjes in bezene
b. Allebei in water
c. Lage concentratie is er dissociatie van het zz
K stijgt tgv hogere concentratie analiet in sp
C) Ideaal gedrag
D) Dissociatief evenwicht met sp=benzene en mp=water
a. Zie B
b. Lage concentratie is er dissociatie
K daalt want meer analiet in mp
Retention
- Nodig voor de scheiding en analyse
- V of T
- tR’=tR-tM (retentietijd-deadtime)
o dead time: tijd alvorens eluens uit de kolom komt)
- v=L/tR (snelheid analieten)
- u=L/tM(snelheid mp)
- 𝑣=𝑢×[fraction of time the solute spends in m.p]=u*n(analiet in mp)/total mol
-
Capacity factor (k’)
=retention factor
K’=ms/mm=(Cs*Vs)/(Cm*Vm)=K*Vs/Vm (1<k’<5)
= migratie snelheid van de oplossing door kolom// hoe
hard de oplossing vertraagd wordt door de kolom
Selectiviteitsfactor(α)
Alfa=KB/KA
Alfa=k’B/k’A=(tRB-Tm)/(tRA-tM)
Resolutie
= hoe goed we 2 pieken kunnen onderscheiden
- Gausische verdeling: overlap (sigma)
3
Chromatography
Introduction
Tsvett: scheiden van plant pigmenten op filtreerpapier mbv petroleumether = principe van
chromatography
- Stationaire fase
niet mengbaar:
o Geïmobiliseerde op vaste drager of wand
verschillende interactie
o Selectief moleculen vertragen
analiet met beide fasen
- Mobiele fase
o Geforceerde beweging door sp
Scheidingsprincipe = verschil in affiniteit anamiet met mobiele fase vs stationaire fase
Retentie v/h analiet door de sp
- Partitie coëfficiënt K
- X(mobile) =X(stationair) (molfractie)
- K=Cs/Cm
Maw K>1 om een goede scheiding te krijgen
Physical separation
Doel: scheiding, identificatie, kwanitificatie
Adhv retentietijden vergelijken met
standaarden (niet 100%)
Thin-layer chromatography
- Snelle scan van de compositie -> gebruiken om ingewikkelde kolom te ontwikkelen
- Gebaseerd op polariteiten
samenstelling
- Sp:silicagel op alumina of cellulose
o Normal phase silica: polaire stationaire fase
o Reversed phase silica : apolair
- Mp:petroleum ether, heptane
Stappenplan
1) verdun de sample met vluchtig solvent
2) TLC plaatje met sample en standaarden
3) Plaats in mp
1
,Samenvatting chromatografie
4) Stop wanneer solvent top van het plaatje bereikt
Zichtbaar maken
resultaten
1) Uv-analyse
2) Ontwikkelen dlc met chemische reactie (thiolen -> zwarte puntjes)
Rf-waarde
Rf= x(analiet)/x(solvent)
Moelijk reproduceerbaard tgv
- Adsorberende laag
- Mp
- Activiteit sp
- T
- Hvh sample
- Damp evenwicht tussen tlc en labo
Kolom chromatografie
Setup
zand nodig om funneling te vookomen
=> level vloeistoffront voor optimale
scheiding
stappenplan
1) Vul de kolom met sp
2) Laat mp vloeien tot op hetzelfde
niveau
3) Breng sample aan
4) Run kolom en neem samples
5) Analyseer de fracties
Analyse v/d fracties
Scheiding is nooit perfect => snelheidsverdeling:klokcurve
2
, Samenvatting chromatografie
General theory
Partitie coëfficiënt (K)
K=Cs/Cm -> liefst lineair verloop
A) Adsorbtie-isotherm:Verzadiging van absortiesites -> lagere
concentratie de analyse uitvoeren
B) Dissociatieve evenwichten: sp=water en mp=benzene curve B
voor zwak zure oplossing
a. Niet gedissocieerde deeltjes in bezene
b. Allebei in water
c. Lage concentratie is er dissociatie van het zz
K stijgt tgv hogere concentratie analiet in sp
C) Ideaal gedrag
D) Dissociatief evenwicht met sp=benzene en mp=water
a. Zie B
b. Lage concentratie is er dissociatie
K daalt want meer analiet in mp
Retention
- Nodig voor de scheiding en analyse
- V of T
- tR’=tR-tM (retentietijd-deadtime)
o dead time: tijd alvorens eluens uit de kolom komt)
- v=L/tR (snelheid analieten)
- u=L/tM(snelheid mp)
- 𝑣=𝑢×[fraction of time the solute spends in m.p]=u*n(analiet in mp)/total mol
-
Capacity factor (k’)
=retention factor
K’=ms/mm=(Cs*Vs)/(Cm*Vm)=K*Vs/Vm (1<k’<5)
= migratie snelheid van de oplossing door kolom// hoe
hard de oplossing vertraagd wordt door de kolom
Selectiviteitsfactor(α)
Alfa=KB/KA
Alfa=k’B/k’A=(tRB-Tm)/(tRA-tM)
Resolutie
= hoe goed we 2 pieken kunnen onderscheiden
- Gausische verdeling: overlap (sigma)
3
