Samenvatting immunologische technieken

IMMUNOLOGISCHE
TECHNIEKEN




2023-2024
FARMACEUTISCHE EN BIOLOGISCHE
LABORATORIUMTECHNOLOGIE
UCLL

,Lowie Boels Immunologische technieken



1. Antilichamen
1. Inleiding
 Immuunsysteem kan reageren op lichaamsvreemde moleculen
 Im-muun  munus = plicht/geschenk
o Bescherming tegen micro-organisme, eliminatie van parasieten en
toxines, bestrijding van tumorgroei
 Aangeboren immuniteit
o Meteen werkzaam bij contact van het lichaamsvreemde molecule
o Door witte bloedcellen
o Dient als eerstelijns-verdediging
 Verworven immuniteit
o Effectief na voorafgaande blootstelling
o Celgemedieerde immuniteit
 Activiteit van T-lymfocyten
 Interageren met antigenen en dan een waaier van
immunologische processen teweeg brengen
 Cytotoxische t-cellen = t-killer cellen
 Doden vreemde cellen
o Humorale immuniteit
 Werking van antilichamen
 = eiwitten in het bloed die kunnen binden aan
antigenen (binnengedrongen pathogenen)
 Hun eigenschappen maakt hun het best geschikt voor in vitro
toepassingen


2. Antilichaamstructuur
3. Algemeen
 Antilichamen = immunoglobulines/antistoffen  glycoproteïne (82-96%
eiwit & 4-18% suiker)
o Taak = organisme beschermen tegen pathogene indringers
(onschadelijk maken of elimineren)



Alle ketens zijn covalent aan
elkaar gebonden  Y

 Door middel van
zwavelbruggen

1X heavy = 50kDa

1X light = 25 kDa

TOTAAL = 150 kDa
(2 H & 2 L)




1

, Lowie Boels Immunologische technieken




 N terminaal:
o Grote variantie in aminozuur-samenstelling  VARIABELE DOMEINEN
o Interageren met antigen
o N-terminaal van heavy chain + N-terminaal van light chain 
antigen-bindingsplaats (paratoop)
 Constante domeinen
o Veel minder variatie in aminozuur-samenstelling
o Interactie met andere componenten

 Lichte keten (VL)
o 1 X N-terminaal  variabel domein
o 1 X C-terminaal  constant domein De eiwitketens zijn compact opgevouwen zodat
 Zware keten (VH)
ze onder veel uiteenlopende condities blijven
o 1 X N-terminaal  variabel domein
functioneren
o 3 X C-terminaal  constant domein



 Proteolytische enzymen knippen
antilichamen
o Papaïne knipt N-terminaal van de
hinge  3 fragmenten ontstaan
 2 armen  Fab-
fragmenten
 C-terminaal  Stam-
fragment
o Pepsine knipt verschillende keren C-
terminaal
 F(ab)2 ontstaat


4. Het variabel deel: Antigenbindingsplaats =
paratoop
 Variabel deel van zware keten en variabel deel van lichte
keten
 Er zijn 3 hypervariabele regio’s aanwezig  hier is de AZ
sequentie stabieler = framewordk regions
o Framework regions blijken B-sheets te vormen van
het domein



Bepaald de vorm van het handje
(bepaalt voor welk antigen dit
Paratoop specifiek is)



 Als VL en VH naast elkaar komen te liggen vormen er 6
hypervariabele lussen  aanmaak van 1 groot
hypervariabel oppervlak dat specifiek met een bepaald Ag kan interageren


2