Samenvatting Methoden in het biomedisch onderzoek Hoofdstuk 10 Chromatografie

Methoden in biomedisch onderzoek
Hoofdstuk 10: chromatografie

Inleiding

 Basis: 2 componenten: stationaire en mobiele fase
o Een mengsel van stoffen wordt opgelost in de mobiele fase en terwijl die in beweging is,
wordt die in contact gebracht met de stationaire fase
o Stoffen in de mobiele fase die minder interageren met de stationaire fase bewegen sneller
dan stoffen die meer interageren  scheiding
 Verschillende systemen mogelijk
o Verschillende types mobiele (vloeibaar/gas) en stationaire (vloeibaar/vast) fases
 Toepassingen:
o Analyse van de resultaten van chemische reacties
o Zuiverheid van medicatie
o Contaminanten in voedsel en drank
o Drugs en doping bij dieren en mensen

Papier/dunne laag chromatografie

 Elutie principe: mobiele fase lost componenten op en voert ze mee doorheen stationaire fase
o Afhankelijk van oplosbaarheid component, affiniteit van component en elutiemiddel voor de
stationaire fase
o Mobiele fase = solvent waarin componenten oplossen
o Stationaire fase = papier of dunne laag van kleine korrels op glas- of kunstplaat
 Kwantificatie
o Rf = A/B
 Rf: vertragingsfactor of Retentiefactor
 A: loopafstand component (cm of mm)
 B: loopafstand eluens front (cm of mm)
o Hoe meer polair het eluens, hoe sterker het eluens zelf geadsorbeerd wordt door de polaire
stationaire fase en des te effectiever de elutie.
o Betere kwantitatieve bepaling voor dunne laag chromatografie

Kolomchromatografie

 Glazen buis gevuld met stationaire fase, mobiele fase word onderaan aangebracht
 De afremming (retentie) van een component wordt veroorzaakt door verschillende moleculaire
eigenschappen, die gekoppeld zijn aan een scheidingsprincipe
o Adsorptie
 Moleculen worden aan het oppervlak van de stationaire fase geadsorbeerd (vooral
gebaseerd op polariteit)
o Oplosbaarheid/verdeling
 Moleculen lossen op in de stationaire fase => een evenwicht tussen de concentratie
in de stationaire en die in de mobiele fase.
 Solvent:
 moet vrij zijn van deeltjes zijn en wordt daarom gefiltreerd (inlaat met
filter).
 moet vrij zijn van opgeloste lucht zijn en wordt daarom tevoren ontgast
 polariteit van oplosmiddel belangrijk