Celbiologische methoden
Methoden hoofdstuk 12
Flow cytometrie
= fluorescence associated cell sorting maar enkel analyze van merkers (gn scheiding cellen)
Doel: nakijken merkers in individuele cellen bepalen welk % cellen bepaalde merker bevat
1) Merker van interesse aangekleurd door cellen met fluorescent gelabeld antilichaam
2) Analyze van combinatie van verschillende merkers mogelijk
3) Resultaten van cellen worden weergegeven in histogram / scatter plot
Scatter plot:
- Cellen linksonder hebben lage fluorescentie voor 1ste en 2de merker (achtergrond)
- Cellen rechtsonder hebben enkel hoge fluorescentie voor 1ste merker
- Cellen linksboven hebben enkel hoge fluorescentie voor 2de merker
- Cellen rechtsboven zouden zowel positief zijn voor 1ste en 2de merker
, Celproliferatie meten via BrdU test
Principe: BrdU is een thymidine-analoog dat tijdens S-fase van celcyclus wordt ingebouwd
Werkwijze:
1) Cellen opgroeien
2) BrdU toevoegen (voor 4 uur) en cellen verder laten groeien
3) Cellen permeabiliseren en gemerkt anti-BrdU antilichaam toevoegen
4) Meten welke cellen BrdU in DNA hebben ingebouwd
Celleefbaarheid meten via MTT test
Principe: mitochondriaal dehydrogenase in levende cellen zet geel MTT om naar paars
paar is evenredig met het aantal levende cellen
Werkwijze:
1) Cellen opgroeien in 96-well plaat
2) Gele MTT oplossing toevoegen en enkele uren incuberen in celcultuurincubator
3) Optische densiteit (absorptie) meten op multi-well plaatlezer
Methoden hoofdstuk 12
Flow cytometrie
= fluorescence associated cell sorting maar enkel analyze van merkers (gn scheiding cellen)
Doel: nakijken merkers in individuele cellen bepalen welk % cellen bepaalde merker bevat
1) Merker van interesse aangekleurd door cellen met fluorescent gelabeld antilichaam
2) Analyze van combinatie van verschillende merkers mogelijk
3) Resultaten van cellen worden weergegeven in histogram / scatter plot
Scatter plot:
- Cellen linksonder hebben lage fluorescentie voor 1ste en 2de merker (achtergrond)
- Cellen rechtsonder hebben enkel hoge fluorescentie voor 1ste merker
- Cellen linksboven hebben enkel hoge fluorescentie voor 2de merker
- Cellen rechtsboven zouden zowel positief zijn voor 1ste en 2de merker
, Celproliferatie meten via BrdU test
Principe: BrdU is een thymidine-analoog dat tijdens S-fase van celcyclus wordt ingebouwd
Werkwijze:
1) Cellen opgroeien
2) BrdU toevoegen (voor 4 uur) en cellen verder laten groeien
3) Cellen permeabiliseren en gemerkt anti-BrdU antilichaam toevoegen
4) Meten welke cellen BrdU in DNA hebben ingebouwd
Celleefbaarheid meten via MTT test
Principe: mitochondriaal dehydrogenase in levende cellen zet geel MTT om naar paars
paar is evenredig met het aantal levende cellen
Werkwijze:
1) Cellen opgroeien in 96-well plaat
2) Gele MTT oplossing toevoegen en enkele uren incuberen in celcultuurincubator
3) Optische densiteit (absorptie) meten op multi-well plaatlezer
