Weefselpreparatie technieken
Lichtmicroscopie en elektronenmicroscopie
Probleem
Indien men een orgaan zal isoleren, kan men niet zien wat erin zit. Bij een long zien we namelijk
uitwendig niet het volledige buizensysteem. Het is juist dit deel dat belangrijk is en dat men wil
onderzoeken.
We zien dat we dunne plakjes nodig hebben en dat het type microscoop belangrijk is om de dikte te
bepalen. Men zal rekening moeten houden met microscoop dus doorlaten van licht of van
elektronen.
o LM: coupe van 30 µm -> dunne preparaten
o EM: coupe van 60 nm -> ultradunne preparaten
Verder is het belangrijk de morfologie te behouden aangezien het net dit is dat men wil visualiseren;
perfect bewaarde cellen en weefsels. Dit kan men oplossen door fixatie!
Chemische fixatie
= stoppen van biochemische processen en vergroting van stabiliteit in het weefsel. Dit is toxisch voor
micro-organismen. Op deze manier kunnen de micro-organismen het weefsel niet aantasten.
Fixatie zal snel gebeuren na isolatie om zo goed mogelijk te bewaren. Dit zal men doen door middel
van cross-linking van eiwitten in de cel.
HCHO is het product dan men zal toevoegen om zo cross links te veroorzaken. Bij dit proces zal water
vrijkomen. Op deze manier wordt het weefsel beter bewaard in een geheel.
Als aldehyde fixatieven zien we:
o LM: formaldehyde of formol -> trager en diep in het weefsel
o EM: glutaaraldehyde -> sneller fixeren
Het moet o snel mogelijk gebeuren op verschillende manieren:
o Immersie: onderdompelen in een bad met fixatief. Dit kan met kleine blokjes want
vanbinnen moet men ook fixeren
o Perfusie: via de bloedbaan om zo fixatief overal te brengen. Men zal met een buffer het
bloed wegspoelen en dan fixatief in de baan sturen.
Na fixeren moet het fixatief weg want dit kan interfereren.
Lichtmicroscopie en elektronenmicroscopie
Probleem
Indien men een orgaan zal isoleren, kan men niet zien wat erin zit. Bij een long zien we namelijk
uitwendig niet het volledige buizensysteem. Het is juist dit deel dat belangrijk is en dat men wil
onderzoeken.
We zien dat we dunne plakjes nodig hebben en dat het type microscoop belangrijk is om de dikte te
bepalen. Men zal rekening moeten houden met microscoop dus doorlaten van licht of van
elektronen.
o LM: coupe van 30 µm -> dunne preparaten
o EM: coupe van 60 nm -> ultradunne preparaten
Verder is het belangrijk de morfologie te behouden aangezien het net dit is dat men wil visualiseren;
perfect bewaarde cellen en weefsels. Dit kan men oplossen door fixatie!
Chemische fixatie
= stoppen van biochemische processen en vergroting van stabiliteit in het weefsel. Dit is toxisch voor
micro-organismen. Op deze manier kunnen de micro-organismen het weefsel niet aantasten.
Fixatie zal snel gebeuren na isolatie om zo goed mogelijk te bewaren. Dit zal men doen door middel
van cross-linking van eiwitten in de cel.
HCHO is het product dan men zal toevoegen om zo cross links te veroorzaken. Bij dit proces zal water
vrijkomen. Op deze manier wordt het weefsel beter bewaard in een geheel.
Als aldehyde fixatieven zien we:
o LM: formaldehyde of formol -> trager en diep in het weefsel
o EM: glutaaraldehyde -> sneller fixeren
Het moet o snel mogelijk gebeuren op verschillende manieren:
o Immersie: onderdompelen in een bad met fixatief. Dit kan met kleine blokjes want
vanbinnen moet men ook fixeren
o Perfusie: via de bloedbaan om zo fixatief overal te brengen. Men zal met een buffer het
bloed wegspoelen en dan fixatief in de baan sturen.
Na fixeren moet het fixatief weg want dit kan interfereren.
