Femke Van Nimmen
S0213580
Praktijkexamen celcultuur en immunochemie
Experiment 1: immunochemie
Je gaat de concentratie bepalen van 2 onbekende stalen door middel van een EIA
EIA: enzym immuno assay (direct competitief heterogeen)
& Waarom EIA?
Enzyme gaat ervoor zorgen dat je antigen zichtbaar wordt (blauw = niet stabiel, geel= stabiel)
& Biotine:
Er wordt een overmaat hiervan toegvoegd om zo zeker te zijn dat alle antigenen (eiwitten) binden
met een biotine-moleculen (antilichaam)
& Sephadex:
Zorgt voor de opzuivering. De grote partikels blijven hierin zitten en de kleine moleculen gaan
doorheen de sephadex. Hierbij zal er wel nog gekalibreerd moeten worden en dit doen we aan de
hand van een bleu-dextran(BD-2000) toe te voegen. (door de blauwe kleur is de timing mogelijk)
We zien dat doorheen onze sephadex de antigeen- gebonden biotine partikels er het snelste
doorheen komen. Dit omdat zij niet in de poreuze gel kunnen intrekken en dus makkelijker door de
kolom kunnen.
! Met welke techniek kan men vrij biotine en antigeen gebonden biotine scheiden van elkaar?
Biotine wordt gebonden op eiwitten. Aangezien we een overmaat van biotine gaan toevoegen, om
zeker te zijn dat alle vrije eiwitten (=antigenen) gebonden worden aan biotine. Hierdoor hebben we
dus vrije/ ongebonden biotine moleculen, deze moeten we verwijderen omdat ze anders zouden
interfereren met de verdere stappen van de immunoassay met een foutief signaal tot gevolg.
De filtratie gaan we doen adhv een sehpadex kolom (ontzoutingskolom). We gaan doorheen de kolom
ons vloeistof sturen. We zien dat er uit onze kolom eerst ons antigeen gebonden biotine gaat komen.
dit komt doordat dit grote partikels zijn en deze niet worden opgenomen door de poreuze gel in ons
kolom en ze dus makkelijk kunnen doorlopen. In tegenstellingen van wat net gezegd bij de
ongebonden biotine moleculen. Deze zal er later pas uit komen.
& Elutiebuffer
Zorgt ervoor dat gel kan zakken, mag zeker nooit droog staan
& BSA:
Biovine serum albunine: is een eiwitbinder zodra gebonden geeft het een blauwe kleur. Hierdoor
kunnen we onze concentraties bepalen van de onbekende stalen
& Bradford reagens
Wordt gebruikt om de eiwitconcentraties in een oplossing te meten. Bindt zich aan de eiwitten en
zodra blauw kleur = gebonden
Bruin geen eiwitten om te binden.
S0213580
Praktijkexamen celcultuur en immunochemie
Experiment 1: immunochemie
Je gaat de concentratie bepalen van 2 onbekende stalen door middel van een EIA
EIA: enzym immuno assay (direct competitief heterogeen)
& Waarom EIA?
Enzyme gaat ervoor zorgen dat je antigen zichtbaar wordt (blauw = niet stabiel, geel= stabiel)
& Biotine:
Er wordt een overmaat hiervan toegvoegd om zo zeker te zijn dat alle antigenen (eiwitten) binden
met een biotine-moleculen (antilichaam)
& Sephadex:
Zorgt voor de opzuivering. De grote partikels blijven hierin zitten en de kleine moleculen gaan
doorheen de sephadex. Hierbij zal er wel nog gekalibreerd moeten worden en dit doen we aan de
hand van een bleu-dextran(BD-2000) toe te voegen. (door de blauwe kleur is de timing mogelijk)
We zien dat doorheen onze sephadex de antigeen- gebonden biotine partikels er het snelste
doorheen komen. Dit omdat zij niet in de poreuze gel kunnen intrekken en dus makkelijker door de
kolom kunnen.
! Met welke techniek kan men vrij biotine en antigeen gebonden biotine scheiden van elkaar?
Biotine wordt gebonden op eiwitten. Aangezien we een overmaat van biotine gaan toevoegen, om
zeker te zijn dat alle vrije eiwitten (=antigenen) gebonden worden aan biotine. Hierdoor hebben we
dus vrije/ ongebonden biotine moleculen, deze moeten we verwijderen omdat ze anders zouden
interfereren met de verdere stappen van de immunoassay met een foutief signaal tot gevolg.
De filtratie gaan we doen adhv een sehpadex kolom (ontzoutingskolom). We gaan doorheen de kolom
ons vloeistof sturen. We zien dat er uit onze kolom eerst ons antigeen gebonden biotine gaat komen.
dit komt doordat dit grote partikels zijn en deze niet worden opgenomen door de poreuze gel in ons
kolom en ze dus makkelijk kunnen doorlopen. In tegenstellingen van wat net gezegd bij de
ongebonden biotine moleculen. Deze zal er later pas uit komen.
& Elutiebuffer
Zorgt ervoor dat gel kan zakken, mag zeker nooit droog staan
& BSA:
Biovine serum albunine: is een eiwitbinder zodra gebonden geeft het een blauwe kleur. Hierdoor
kunnen we onze concentraties bepalen van de onbekende stalen
& Bradford reagens
Wordt gebruikt om de eiwitconcentraties in een oplossing te meten. Bindt zich aan de eiwitten en
zodra blauw kleur = gebonden
Bruin geen eiwitten om te binden.
