Extracción y análisis de ADN genómico with accurate answers (verified)Graded A

Ácido desoxirribonucleico (ADN) - Answers-Es la molécula que contiene toda la información que la célula necesita para vivir y propagarse a sí misma. Está presente en cualquier célula nucleada. ¿De dónde se puede obtener el ADN? - Answers-De muestras como tejido fresco, congelado o embebido en parafina; de huesos, dientes y cabellos (que tengan raíz); células recuperadas de cultivos celulares o las obtenidas mediante raspados de mucosas, como carrillo bucal; líquidos biológicos como sangre, orina, líquido cefalorraquídeo, semen, saliva y líquido amniótico. ¿Qué se debe de considerar al momento de elegir una técnica de extracción de ADN? - Answers-El tipo y la cantidad de la muestra que se va a extraer, el rendimiento y la integridad del ADN que puede obtenerse con cada técnica, el empleo de reactivos peligrosos y el costo de los reactivos utilizados en el procedimiento. Técnica de extracción TSNT - Answers-El primer paso consiste en lisar las células por la acción desnaturalizante de los detergentes SDS y Tritón X-100. Las proteínas desnaturalizadas son extraídas con fenol y Sevag, al centrifugar forman una placa sólida en la interfase, entre la fase acuosa y la orgánica. Al centrifugar las proteínas desnaturalizadas, ¿qué fase se encuentra en la parte superior del contenedor? ¿Qué se encuentra en esta fase? - Answers-La parte superior corresponde a la fase acuosa, la cual contiene el ADN. ¿Cómo se precipita el ADN de la fase acuosa? - Answers-Agregando etanol. ¿Qué se hace al ADN obtenido? - Answers-Se lava con etanol al 70% para eliminar sales, se seca y se disuelve en una solución amortiguadora de Tris-EDTA (TE). ¿Cómo se pueden determinar la calidad y cantidad del ADN obtenido? - Answers-Se pueden determinar mediante espectrofotometría de luz ultravioleta (U.V.) y/o fluorometría entre otros. ¿Cómo se puede determinar la integridad del ADN obtenido? - Answers-Mediante electroforesis en gel de agarosa. Punto clave para la éxito de la extracción de ADN - Answers-Evitar la degradación del ADN por la acción de nucleasas (ADNsas), por lo que se debe de tener cuidado en la preparación de los reactivos, los materiales y las condiciones del experimentador. ¿Qué pasa si el ADN obtenido con la técnica de TSNT es de buena calidad? - Answers-Puede ser digerido con enzimas de restricción y utilizarse en ensayos de amplificación mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) Análisis de ADN por espectrofotometría de luz ultravioleta (U.V.) - Answers-Se basa en la propiedad del ADN de absorber a 1260 nm. ¿Cómo se calcula la concentración de ADN en la muestra? - Answers-Se calcula considerando que D.O.=1 corresponde a 50 µg/mL de ADN de doble cadena. D.O.= Densidad óptica