Grenssedimentatie/ differentiële Zonesedimentatie/ Isopycnische centrifugatie/
centrifugatie dichtheidsgradiëntscentrifugatie evenwichtsdichtheidscentrifugatie
1. vaste hoek rotor: sedimenterende deeltjes 1. mengsel van cellulaire componenten Vereist dat ergens in de gradiënt de
bereiken de wand en schuiven langs de wand wordt op oppervlak van de verticale kolom dichtheid van de oplossing gelijk is aan die
van de buis gebracht van het solvent
2. uitzwaaiende buis: kleine fractie van de 2. centrifugale kracht -> sedimentatie van de Als dichtheid oplossing > dichtheid solvent ->
deeltjes bereikt de wand, meeste deeltjes partikels in zones (afhankelijk van de sedimentatie
gaan naar de bodem relatieve mobiliteit van elk partikel) Als dichtheid oplossing < dichtheid solvent ->
3. zones worden gepelleteerd flotatie
Start: in homogeen gevulde centrifugeerbuis 4. voordat er een opgemengde pellet kan
die in rotor wordt geplaatst ontstaan -> stop van centrifugatie Gebruik maken van densiteitsgradiënt ->
opgebouwd door centrifugale kracht op een
Nadeel: lage resolutie - Uitgevoerd in uitzwaaiende buis rotor solvent dat bv. zouten bevat van zware
Reden: enkel de traagste component wordt - Discrete band: tijdens loop van de metalen
volledig gescheiden van de anderen doordat centrifugatie: verhoging van wrijvingskracht -> zout met hoge oplosbaarheid, laag MW en
in het begin alle componenten vermengd zijn en flotatiekracht laat snelle diffusie toe
met het solvent en beginnen te migreren na - Betere resolutie bij zwakkere
centrifugatie (de ene sneller dan de andere) densiteitsgradiënt (dichtheid neemt toe van Gradiënt wordt opgebouwd tijdens de
meniscus naar bodem) centrifugatie
-Hoogte discrete band = afhankelijk van de -> gevolg van centrifugale kracht op zware
massa en de grootte van de deeltjes metaal en van diffusie
-> ultracentrifuge is vereist
Stappen gradiënt: meerdere vloeistoflagen -> diffusie en sedimentatie: nieuw evenwicht
met een dalende dichtheid worden boven instellen waarbij de concentratie solvent
elkaar gebracht parabolisch verandert met de afstand tot het
Lineaire gradiënt: communicerende vaten rotorcentrum + oplossing concentreert zich
gevuld met een oplossing van begin- en in het overeenstemmend solvent gebied
einddichtheid van de gradiënt
-> banden blijven gescheiden eens ze
-> banden worden gepelleteerd na enige tijd gevormd zijn
centrifugatie dichtheidsgradiëntscentrifugatie evenwichtsdichtheidscentrifugatie
1. vaste hoek rotor: sedimenterende deeltjes 1. mengsel van cellulaire componenten Vereist dat ergens in de gradiënt de
bereiken de wand en schuiven langs de wand wordt op oppervlak van de verticale kolom dichtheid van de oplossing gelijk is aan die
van de buis gebracht van het solvent
2. uitzwaaiende buis: kleine fractie van de 2. centrifugale kracht -> sedimentatie van de Als dichtheid oplossing > dichtheid solvent ->
deeltjes bereikt de wand, meeste deeltjes partikels in zones (afhankelijk van de sedimentatie
gaan naar de bodem relatieve mobiliteit van elk partikel) Als dichtheid oplossing < dichtheid solvent ->
3. zones worden gepelleteerd flotatie
Start: in homogeen gevulde centrifugeerbuis 4. voordat er een opgemengde pellet kan
die in rotor wordt geplaatst ontstaan -> stop van centrifugatie Gebruik maken van densiteitsgradiënt ->
opgebouwd door centrifugale kracht op een
Nadeel: lage resolutie - Uitgevoerd in uitzwaaiende buis rotor solvent dat bv. zouten bevat van zware
Reden: enkel de traagste component wordt - Discrete band: tijdens loop van de metalen
volledig gescheiden van de anderen doordat centrifugatie: verhoging van wrijvingskracht -> zout met hoge oplosbaarheid, laag MW en
in het begin alle componenten vermengd zijn en flotatiekracht laat snelle diffusie toe
met het solvent en beginnen te migreren na - Betere resolutie bij zwakkere
centrifugatie (de ene sneller dan de andere) densiteitsgradiënt (dichtheid neemt toe van Gradiënt wordt opgebouwd tijdens de
meniscus naar bodem) centrifugatie
-Hoogte discrete band = afhankelijk van de -> gevolg van centrifugale kracht op zware
massa en de grootte van de deeltjes metaal en van diffusie
-> ultracentrifuge is vereist
Stappen gradiënt: meerdere vloeistoflagen -> diffusie en sedimentatie: nieuw evenwicht
met een dalende dichtheid worden boven instellen waarbij de concentratie solvent
elkaar gebracht parabolisch verandert met de afstand tot het
Lineaire gradiënt: communicerende vaten rotorcentrum + oplossing concentreert zich
gevuld met een oplossing van begin- en in het overeenstemmend solvent gebied
einddichtheid van de gradiënt
-> banden blijven gescheiden eens ze
-> banden worden gepelleteerd na enige tijd gevormd zijn
