Naam Isabel de
Vette
Klas BM2O-zij
Datum 11-1-2023
Thema & module BTCEI
code B06CIE
Titel experiment ELISA 2
coating
Doel van het experiment
Het coaten van de ELISA-plaat met IFNϒ.
Principes technieken
ELISA principe: er vindt interactie plaats tussen de analyt van het monster
en het antilichaam-antigeensysteem. Deze interactie kan worden
gevisualiseerd door enzymen, gekoppeld aan secundaire antilichamen of
antigenen, en geeft aan of zich een antilichaam aan een antigeen heeft
gebonden. Een toegevoegd substraat wordt door het gekoppelde enzym
omgezet met kleurverandering als gevolg. Deze kan worden gemeten met
een spectrofotometer, in dit geval bij 415nm.
Materialen en risico-analyse
Rabbitαhumaan IFNy (4g/L)
96-wells plaat (Greiner ELISA plaat)
PBS
Multichannel pipet + puntjes
Bakjes voor vloeistof voor de multichannel
Kleeffolie voor afdekken van de platen
Snijmachine/schaar voor het op maat maken van kleeffolie voor afdekken
platen
Methode
1. Verdun RαH IFNy in PBS vanuit de stock 1500x en meng goed. (Bereken
dus eerst hoeveel je nodig hebt)
Eerst PBS verdunnen --> 1mL PBS + 9mL demiwater
150µl x 48 welletjes = 7200µl, je maakt een overmaat dus 7500µl
7500/1500 = 5µl IFNy
5µl RαH IFNy + 7500µl PBS
2. Coat de helft (kolom 1 t/m 6) van de 96-wells plaat met 150 µl van deze
verdunning.
3. Dek de ELISA plaat af met folie (zelf even op maat snijden/knippen)
4. Incubeer tot ELISA2_PRT/02_ELISA bij 4°C.
1
, Naam Isabel de
Vette
Klas BM2O-zij
Datum 18-1-2023
Thema & module BTCEI
code B06CIE
Titel experiment ELISA 2
Doel van het experiment
Onderzoeken welke cellen IFN-ϒ produceren.
Onderzoeken hoeveel IFN-ϒ er wordt geproduceerd door de cellen.
Dit gebeurt met behulp van een sandwich ELISA
Verwachting van het experiment
IFN-ϒ wordt door T-cellen geproduceerd. In welke buis de IFN-ϒ wordt
aangetoond, bevatten automatisch de T-cellen. De andere buis zal dan
de B-cellen bevatten.
Principes technieken
ELISA principe: er vindt interactie plaats tussen de analyt van het
monster en het antilichaam-antigeensysteem. Deze interactie kan
worden gevisualiseerd door enzymen, gekoppeld aan secundaire
antilichamen of antigenen, en geeft aan of zich een antilichaam aan
een antigeen heeft gebonden. Een toegevoegd substraat wordt door
het gekoppelde enzym omgezet met kleurverandering als gevolg. Deze
kan worden gemeten met een spectrofotometer, in dit geval bij
415nm.
Materialen en risico-analyse
Gecoate 96-wells ELISA plaat uit PT02 coating
Supernatant van ongestimuleerde en gestimuleerde cellen uit buis A
Supernatant van ongestimuleerde en gestimuleerde cellen uit buis B
IFNY standaard (200 U/ml)
Anti-humaan-IFNy-HRP
PBS
Tween #RA 13
BSA
ELISA buffer (PBS + 0,05%Tween) (zelf vers maken)
ELISA blockbuffer (PBS/Tween buffer + 2%BSA) (zelf vers maken
ongeveer
ABTS oplossing #RA 14
H2O2 #RA 11
Stopbuffer (2% oxaalzuur) #RA 12
37°C Stoof
Multichannel pipet
Pipetten
Microplate reader
2
Vette
Klas BM2O-zij
Datum 11-1-2023
Thema & module BTCEI
code B06CIE
Titel experiment ELISA 2
coating
Doel van het experiment
Het coaten van de ELISA-plaat met IFNϒ.
Principes technieken
ELISA principe: er vindt interactie plaats tussen de analyt van het monster
en het antilichaam-antigeensysteem. Deze interactie kan worden
gevisualiseerd door enzymen, gekoppeld aan secundaire antilichamen of
antigenen, en geeft aan of zich een antilichaam aan een antigeen heeft
gebonden. Een toegevoegd substraat wordt door het gekoppelde enzym
omgezet met kleurverandering als gevolg. Deze kan worden gemeten met
een spectrofotometer, in dit geval bij 415nm.
Materialen en risico-analyse
Rabbitαhumaan IFNy (4g/L)
96-wells plaat (Greiner ELISA plaat)
PBS
Multichannel pipet + puntjes
Bakjes voor vloeistof voor de multichannel
Kleeffolie voor afdekken van de platen
Snijmachine/schaar voor het op maat maken van kleeffolie voor afdekken
platen
Methode
1. Verdun RαH IFNy in PBS vanuit de stock 1500x en meng goed. (Bereken
dus eerst hoeveel je nodig hebt)
Eerst PBS verdunnen --> 1mL PBS + 9mL demiwater
150µl x 48 welletjes = 7200µl, je maakt een overmaat dus 7500µl
7500/1500 = 5µl IFNy
5µl RαH IFNy + 7500µl PBS
2. Coat de helft (kolom 1 t/m 6) van de 96-wells plaat met 150 µl van deze
verdunning.
3. Dek de ELISA plaat af met folie (zelf even op maat snijden/knippen)
4. Incubeer tot ELISA2_PRT/02_ELISA bij 4°C.
1
, Naam Isabel de
Vette
Klas BM2O-zij
Datum 18-1-2023
Thema & module BTCEI
code B06CIE
Titel experiment ELISA 2
Doel van het experiment
Onderzoeken welke cellen IFN-ϒ produceren.
Onderzoeken hoeveel IFN-ϒ er wordt geproduceerd door de cellen.
Dit gebeurt met behulp van een sandwich ELISA
Verwachting van het experiment
IFN-ϒ wordt door T-cellen geproduceerd. In welke buis de IFN-ϒ wordt
aangetoond, bevatten automatisch de T-cellen. De andere buis zal dan
de B-cellen bevatten.
Principes technieken
ELISA principe: er vindt interactie plaats tussen de analyt van het
monster en het antilichaam-antigeensysteem. Deze interactie kan
worden gevisualiseerd door enzymen, gekoppeld aan secundaire
antilichamen of antigenen, en geeft aan of zich een antilichaam aan
een antigeen heeft gebonden. Een toegevoegd substraat wordt door
het gekoppelde enzym omgezet met kleurverandering als gevolg. Deze
kan worden gemeten met een spectrofotometer, in dit geval bij
415nm.
Materialen en risico-analyse
Gecoate 96-wells ELISA plaat uit PT02 coating
Supernatant van ongestimuleerde en gestimuleerde cellen uit buis A
Supernatant van ongestimuleerde en gestimuleerde cellen uit buis B
IFNY standaard (200 U/ml)
Anti-humaan-IFNy-HRP
PBS
Tween #RA 13
BSA
ELISA buffer (PBS + 0,05%Tween) (zelf vers maken)
ELISA blockbuffer (PBS/Tween buffer + 2%BSA) (zelf vers maken
ongeveer
ABTS oplossing #RA 14
H2O2 #RA 11
Stopbuffer (2% oxaalzuur) #RA 12
37°C Stoof
Multichannel pipet
Pipetten
Microplate reader
2
