Practicumverslag
CYTOSKELET
Daphne Bonekamp
S3520773
Werkgroep 2
24-10-2022
, Inleiding
Het cytoskelet is een web van filamenten in een eukaryote cel. Het cytoskelet zorgt
voor celdeling, transport, stevigheid en beweeglijkheid voor de cel. Het cytoskelet
bestaat uit microtubuli, microfilamenten en intermediaire filamenten. In dit practicum
wordt er gekeken naar microtubuli en microfilamenten.
Microtubuli zijn buisvormige structuren die vanuit de celkern uitspreiden over de
gehele cel. Ze spelen een rol bij celdeling en ze zijn belangrijk voor de vesicle
transport in de cel. Tubuline kan worden gekleurd met behulp van antilichamen met
daaraan gebonden het fluorochroom Alexa488, deze kan dan als groene kleur worden
waargenomen onder de fluorescentiemicroscoop.
Microfilamenten bestaan voornamelijk uit het eiwit actine. Deze eiwitten zijn
polymeren en vormen in het cytoskelet kleine strengen. Ze bevinden zich gewoonlijk
in de omgeving van de celmembraan en zorgen voor stevigheid en beweeglijkheid.1
Actine kan worden gekleurd door de toxische stof Phalloidine, als hier het
fluorochroom Alexa594 wordt gekoppeld. Dit kan als rode kleur worden weergegeven
onder de fluorescentiemicroscoop.
De celkern bevindt zich midden in dit cytoskelet. Om de vorm van het cytoskelet te
kunnen weergeven is het daarom handig om deze nuclei ook aan te kleuren. Dit kan
gedaan worden door de DNA-kleurstof DAPI. Deze kleurt de celkernen blauw.2
Ik verwacht dus tijdens deze immuno-cytochemische proef blauwe celkernen te zien,
met daar omheen rode actine strengen. De microtubuli vormen volgens verwachting
vanuit de kernzone een web in de cel. In preparaat 1 (gepermeabiliseerd) verwacht ik
meer tubuline (groene kleuring) aan te treffen, omdat de antilichamen met
fluorochromen hier makkelijker binnen kunnen dringen dan in het niet
gepermeabiliseerde preparaat.
Methode
Voor dit experiment is gebruik gemaakt van 2 preparaten, zodat er gekeken kan
worden naar de specificiteit van de kleuring. De preparaten bestaan uit twee
objectglaasjes met daarop gekweekte embryonale muizen fibroblasten, die gefixeerd
en gewassen zijn in petrischalen.
CYTOSKELET
Daphne Bonekamp
S3520773
Werkgroep 2
24-10-2022
, Inleiding
Het cytoskelet is een web van filamenten in een eukaryote cel. Het cytoskelet zorgt
voor celdeling, transport, stevigheid en beweeglijkheid voor de cel. Het cytoskelet
bestaat uit microtubuli, microfilamenten en intermediaire filamenten. In dit practicum
wordt er gekeken naar microtubuli en microfilamenten.
Microtubuli zijn buisvormige structuren die vanuit de celkern uitspreiden over de
gehele cel. Ze spelen een rol bij celdeling en ze zijn belangrijk voor de vesicle
transport in de cel. Tubuline kan worden gekleurd met behulp van antilichamen met
daaraan gebonden het fluorochroom Alexa488, deze kan dan als groene kleur worden
waargenomen onder de fluorescentiemicroscoop.
Microfilamenten bestaan voornamelijk uit het eiwit actine. Deze eiwitten zijn
polymeren en vormen in het cytoskelet kleine strengen. Ze bevinden zich gewoonlijk
in de omgeving van de celmembraan en zorgen voor stevigheid en beweeglijkheid.1
Actine kan worden gekleurd door de toxische stof Phalloidine, als hier het
fluorochroom Alexa594 wordt gekoppeld. Dit kan als rode kleur worden weergegeven
onder de fluorescentiemicroscoop.
De celkern bevindt zich midden in dit cytoskelet. Om de vorm van het cytoskelet te
kunnen weergeven is het daarom handig om deze nuclei ook aan te kleuren. Dit kan
gedaan worden door de DNA-kleurstof DAPI. Deze kleurt de celkernen blauw.2
Ik verwacht dus tijdens deze immuno-cytochemische proef blauwe celkernen te zien,
met daar omheen rode actine strengen. De microtubuli vormen volgens verwachting
vanuit de kernzone een web in de cel. In preparaat 1 (gepermeabiliseerd) verwacht ik
meer tubuline (groene kleuring) aan te treffen, omdat de antilichamen met
fluorochromen hier makkelijker binnen kunnen dringen dan in het niet
gepermeabiliseerde preparaat.
Methode
Voor dit experiment is gebruik gemaakt van 2 preparaten, zodat er gekeken kan
worden naar de specificiteit van de kleuring. De preparaten bestaan uit twee
objectglaasjes met daarop gekweekte embryonale muizen fibroblasten, die gefixeerd
en gewassen zijn in petrischalen.
