Bepaling van de concentratie van paracetamol in een vams staal
Principe:
Klinische bepalingen → standaard matrices bloed, plasma of serum via een veneuze
bloedafname
Nadeel: indien veel en/of frequent bloedafnames nodig zijn: invasief.
Alternatief: gedroogde bloedspots (DBS) bekomen na een gewone vingerprik
Voordelen: - de techniek is gemakkelijk (zowel arts als patiënt zelf kan het doen)
- het is minder invasief (vinger- of hielprik)
- slechts een klein staalvolume wordt afgenomen (10-50 µL bloed versus
4 mL bij veneuze bloedafname)
Een specifiek voorbeeld van microsampling is de ‘VAMS’ techniek of Volumetric
Absorptive MicroSampling.
• Hydrofiele, absorberende polymere witte tip bevestigd op een plastieken houder
• Absorberende tip neemt een vaste hoeveelheid bloed op (ong. 10, 20 of 30 µL)
• Practicum: bepaling van paracetamol met VAMS, als voorbeeldgeneesmiddel
Fig 1. Afname VAMS.
Vooraleer de paracetamolconcentratie van een microsample bepaald kan worden via
LC-MS/MS is er staalvoorbereiding nodig, de “extractie”.
• Vloeistofchromatografie: enkel zuivere stalen op de kolom brengen
• Staalopzuivering gebaseerd op proteïne precipitatie:
o proteïnen worden uit het staal verwijderd
o paracetamol wordt geëxtraheerd uit het VAMS-staal in de extractie-
of precipitatievloeistof
Staalname:
Er wordt gewerkt met een VAMS-staal van volbloed. Staalname van VAMS na vingerprik
dient te gebeuren aan de hand van onderstaande werkwijze (wordt niet uitgevoerd in het
practicum en is ter illustratie):
, Er wordt gewerkt met een VAMS-staal van volbloed. In het practicum wordt de
staalname van VAMS uitgevoerd adhv bloed in een eppje in plaats van via vingerprik.
Startmateriaal:
• Een eerste bloedstaal met daarin de onbekende in een 2 mL eppje.
• Een tweede bloedstaal met daarin calibrator of QC in een 2 mL eppje.
• 3 VAMS devices
• Pipettors en filtertips zijn ter beschikking.
• Een fles met 80/20/0,01 (v/v) methanol/water/mierenzuur (het extractiesolvent),
met daarin de paracetamol interne standaard (0,04 µg/mL), een fles met 0,01%
(v/v) mierenzuur in water.
• Een Waters UPLC systeem gekoppeld aan een Waters Xevo TQ-S
massaspectrometer als detector zal gebruikt worden voor de bepaling van de
paracetamolconcentratie.
!! Aandachtspunten voor staalname:
• Pipeteer 200 µL in het ‘dekseltje’ van het eppje voor een makkelijke staalname.
• Hou de VAMS tip onder een hoek van ongeveer 45°C.
• Dompel de VAMS tip niet volledig onder in het bloed, maar zorg dat deze het
bloedoppervlak net raakt.
• Wacht 5 seconden nadat de tip visueel gevuld lijkt.
• Laat minimaal 2 uur drogen (in tussentijd voeren jullie het practicum PL2 uit)
Principe:
Klinische bepalingen → standaard matrices bloed, plasma of serum via een veneuze
bloedafname
Nadeel: indien veel en/of frequent bloedafnames nodig zijn: invasief.
Alternatief: gedroogde bloedspots (DBS) bekomen na een gewone vingerprik
Voordelen: - de techniek is gemakkelijk (zowel arts als patiënt zelf kan het doen)
- het is minder invasief (vinger- of hielprik)
- slechts een klein staalvolume wordt afgenomen (10-50 µL bloed versus
4 mL bij veneuze bloedafname)
Een specifiek voorbeeld van microsampling is de ‘VAMS’ techniek of Volumetric
Absorptive MicroSampling.
• Hydrofiele, absorberende polymere witte tip bevestigd op een plastieken houder
• Absorberende tip neemt een vaste hoeveelheid bloed op (ong. 10, 20 of 30 µL)
• Practicum: bepaling van paracetamol met VAMS, als voorbeeldgeneesmiddel
Fig 1. Afname VAMS.
Vooraleer de paracetamolconcentratie van een microsample bepaald kan worden via
LC-MS/MS is er staalvoorbereiding nodig, de “extractie”.
• Vloeistofchromatografie: enkel zuivere stalen op de kolom brengen
• Staalopzuivering gebaseerd op proteïne precipitatie:
o proteïnen worden uit het staal verwijderd
o paracetamol wordt geëxtraheerd uit het VAMS-staal in de extractie-
of precipitatievloeistof
Staalname:
Er wordt gewerkt met een VAMS-staal van volbloed. Staalname van VAMS na vingerprik
dient te gebeuren aan de hand van onderstaande werkwijze (wordt niet uitgevoerd in het
practicum en is ter illustratie):
, Er wordt gewerkt met een VAMS-staal van volbloed. In het practicum wordt de
staalname van VAMS uitgevoerd adhv bloed in een eppje in plaats van via vingerprik.
Startmateriaal:
• Een eerste bloedstaal met daarin de onbekende in een 2 mL eppje.
• Een tweede bloedstaal met daarin calibrator of QC in een 2 mL eppje.
• 3 VAMS devices
• Pipettors en filtertips zijn ter beschikking.
• Een fles met 80/20/0,01 (v/v) methanol/water/mierenzuur (het extractiesolvent),
met daarin de paracetamol interne standaard (0,04 µg/mL), een fles met 0,01%
(v/v) mierenzuur in water.
• Een Waters UPLC systeem gekoppeld aan een Waters Xevo TQ-S
massaspectrometer als detector zal gebruikt worden voor de bepaling van de
paracetamolconcentratie.
!! Aandachtspunten voor staalname:
• Pipeteer 200 µL in het ‘dekseltje’ van het eppje voor een makkelijke staalname.
• Hou de VAMS tip onder een hoek van ongeveer 45°C.
• Dompel de VAMS tip niet volledig onder in het bloed, maar zorg dat deze het
bloedoppervlak net raakt.
• Wacht 5 seconden nadat de tip visueel gevuld lijkt.
• Laat minimaal 2 uur drogen (in tussentijd voeren jullie het practicum PL2 uit)
