Chromatografische analyse
samenvatting
Contents
GC-optimalisatie.....................................................................................................................................2
Het beinvloeden van de selectiviteit...................................................................................................3
Beinvloeden schotelgetal N................................................................................................................3
De van Deemter vergelijking...............................................................................................................3
EDDY-diffusie (A).............................................................................................................................4
Longitudinale diffusie (B)................................................................................................................5
Massaoverdracht (C).......................................................................................................................5
GC-toepassingen.....................................................................................................................................6
Stationaire fase (kolom)......................................................................................................................7
Mobiele fase.......................................................................................................................................7
Injector...............................................................................................................................................8
Detector............................................................................................................................................10
HPLC-optimalisatie...............................................................................................................................11
De mobiele fase in RP-HPLC..............................................................................................................11
Kolom in RP-HPLC.............................................................................................................................12
HPLC-toepassingen...............................................................................................................................13
Kolomkeuze......................................................................................................................................13
Mobiele fase.....................................................................................................................................13
Detector............................................................................................................................................13
Principes van monstervoorbewerking..................................................................................................14
Liquid-liquid extraction (LLE)............................................................................................................14
Solid-phase extraction......................................................................................................................15
QuEChERS.........................................................................................................................................16
Analiet eigenschappen in monstervoorbewerking...............................................................................17
Ion exchange chromatography.............................................................................................................18
Algemene berekeningen.......................................................................................................................20
Chromatografie.................................................................................................................................20
Monstervoorbewerking....................................................................................................................22
IEX.....................................................................................................................................................23
,GC-optimalisatie
Retentiefactor, k, beschrijft hoeveel tijd de component in de stationaire fase doorbrengt ten opzichte
van de mobiele fase.
Selectiviteit, , de selectiviteit factor, die de relatieve scheiding tussen twee componenten beschrijft.
Schotelgetal, N, geeft het aantal theoretische platen van de kolom. Dit is een maat voor de efficiëntie
van de kolom, hoe hoger N hoe scherper de pieken.
Deze formule combineert alle belangrijke parameters die de scheiding beïnvloeden in één
vergelijking. Je kunt de resolutie verbeteren door:
1. De selectiviteit te vergroten. Bijvoorbeeld door een andere stationaire fase te gebruiken die
de affiniteit van de verschillende analieten met de stationaire fase vergroot
2. De retentiefactor te optimaliseren. Dit kan door de mobiele fase of het temperatuur
progamma aan te passen.
3. De kolomefficientie te verhogen. Bijvoorbeeld door een langere kolom te gebruiken of
kleinere deeltjes in de stationaire fase.’
Het beïnvloeden van de retentiefactor
is van belang om een goede scheiding (resolutie) te krijgen met een redelijke retentietijd. Voor de GC
kan er gespeeld worden met het temperatuurprogamma van de oven. De vuistregel voor het
optimaliseren van het ovenprogamma van een GC :
1. Optimaliseer eerst met een isotherm progamma voor een goede k van de eerste
componenten
2. De laatste componenten hebben een grote k gebruik hiervoor een temperatuurprogamma
(Gradiënt)
, Het beinvloeden van de selectiviteit
De selectiviteit is een cruciale factor in chromatogrfaie, omdat het bepaalt hoe goed twee
componenten van elkaar gescheiden worden. het geeft de relatieve relatie aan van twee
componenten. Selectiviteit heeft een directe exponentiele invloed op de resolutie, een kleine
verandering in selectiviteit kan een groot verschil maken in hoe goed pieken gescheiden worden. dit
is essentieel bij overlappende pieken en is vaak de meest effectieve manier om resolutie te
verbeteren.
De belangrijkste manier om de selectiviteit aan te passen is door te spelen met de
kolomeigenschappen. De interacties tussen de stationaire fase en analyten bepalen hoe sterk ze
worden vastgehouden, en dus de retentietijd. Door een andere stationaire fase te kiezen, kunnen de
relatieve retenties worden beïnvloed.
Kolom 1: apolair kolom 2: polair
Beinvloeden schotelgetal N
Het schotelgetal is een maat voor de efficientie van een chromatografische kolom. Het beschrijft
hoeveel theoretische platen een kolom heeft en geeft aan hoe goed een analietband wordt
gescheiden terwijl het door de kolom beweegt. Hoe hoger N, hoe smaller de pieken en hoe beter de
scheiding.
Het schotelgetal speelt ook een directe rol in de resolutie. Als het schotelgetal verdubbeldt neemt de
resolutie toe met een factor √2 (ongeveer 1,41). Een hoger schotelgetal leidt tot scherpere pieken,
wat de detecteerbaarheid van de analieten verbetert, vooral als de pieken dicht bij elkaar liggen.
Het schotel getal kan geoptimaliseerd worden door factoren die bandverbreding beinvloeden te
minimaliseren. Bandverbreding wordt beschreven door De van Deemter vergelijking.
De van Deemter vergelijking
samenvatting
Contents
GC-optimalisatie.....................................................................................................................................2
Het beinvloeden van de selectiviteit...................................................................................................3
Beinvloeden schotelgetal N................................................................................................................3
De van Deemter vergelijking...............................................................................................................3
EDDY-diffusie (A).............................................................................................................................4
Longitudinale diffusie (B)................................................................................................................5
Massaoverdracht (C).......................................................................................................................5
GC-toepassingen.....................................................................................................................................6
Stationaire fase (kolom)......................................................................................................................7
Mobiele fase.......................................................................................................................................7
Injector...............................................................................................................................................8
Detector............................................................................................................................................10
HPLC-optimalisatie...............................................................................................................................11
De mobiele fase in RP-HPLC..............................................................................................................11
Kolom in RP-HPLC.............................................................................................................................12
HPLC-toepassingen...............................................................................................................................13
Kolomkeuze......................................................................................................................................13
Mobiele fase.....................................................................................................................................13
Detector............................................................................................................................................13
Principes van monstervoorbewerking..................................................................................................14
Liquid-liquid extraction (LLE)............................................................................................................14
Solid-phase extraction......................................................................................................................15
QuEChERS.........................................................................................................................................16
Analiet eigenschappen in monstervoorbewerking...............................................................................17
Ion exchange chromatography.............................................................................................................18
Algemene berekeningen.......................................................................................................................20
Chromatografie.................................................................................................................................20
Monstervoorbewerking....................................................................................................................22
IEX.....................................................................................................................................................23
,GC-optimalisatie
Retentiefactor, k, beschrijft hoeveel tijd de component in de stationaire fase doorbrengt ten opzichte
van de mobiele fase.
Selectiviteit, , de selectiviteit factor, die de relatieve scheiding tussen twee componenten beschrijft.
Schotelgetal, N, geeft het aantal theoretische platen van de kolom. Dit is een maat voor de efficiëntie
van de kolom, hoe hoger N hoe scherper de pieken.
Deze formule combineert alle belangrijke parameters die de scheiding beïnvloeden in één
vergelijking. Je kunt de resolutie verbeteren door:
1. De selectiviteit te vergroten. Bijvoorbeeld door een andere stationaire fase te gebruiken die
de affiniteit van de verschillende analieten met de stationaire fase vergroot
2. De retentiefactor te optimaliseren. Dit kan door de mobiele fase of het temperatuur
progamma aan te passen.
3. De kolomefficientie te verhogen. Bijvoorbeeld door een langere kolom te gebruiken of
kleinere deeltjes in de stationaire fase.’
Het beïnvloeden van de retentiefactor
is van belang om een goede scheiding (resolutie) te krijgen met een redelijke retentietijd. Voor de GC
kan er gespeeld worden met het temperatuurprogamma van de oven. De vuistregel voor het
optimaliseren van het ovenprogamma van een GC :
1. Optimaliseer eerst met een isotherm progamma voor een goede k van de eerste
componenten
2. De laatste componenten hebben een grote k gebruik hiervoor een temperatuurprogamma
(Gradiënt)
, Het beinvloeden van de selectiviteit
De selectiviteit is een cruciale factor in chromatogrfaie, omdat het bepaalt hoe goed twee
componenten van elkaar gescheiden worden. het geeft de relatieve relatie aan van twee
componenten. Selectiviteit heeft een directe exponentiele invloed op de resolutie, een kleine
verandering in selectiviteit kan een groot verschil maken in hoe goed pieken gescheiden worden. dit
is essentieel bij overlappende pieken en is vaak de meest effectieve manier om resolutie te
verbeteren.
De belangrijkste manier om de selectiviteit aan te passen is door te spelen met de
kolomeigenschappen. De interacties tussen de stationaire fase en analyten bepalen hoe sterk ze
worden vastgehouden, en dus de retentietijd. Door een andere stationaire fase te kiezen, kunnen de
relatieve retenties worden beïnvloed.
Kolom 1: apolair kolom 2: polair
Beinvloeden schotelgetal N
Het schotelgetal is een maat voor de efficientie van een chromatografische kolom. Het beschrijft
hoeveel theoretische platen een kolom heeft en geeft aan hoe goed een analietband wordt
gescheiden terwijl het door de kolom beweegt. Hoe hoger N, hoe smaller de pieken en hoe beter de
scheiding.
Het schotelgetal speelt ook een directe rol in de resolutie. Als het schotelgetal verdubbeldt neemt de
resolutie toe met een factor √2 (ongeveer 1,41). Een hoger schotelgetal leidt tot scherpere pieken,
wat de detecteerbaarheid van de analieten verbetert, vooral als de pieken dicht bij elkaar liggen.
Het schotel getal kan geoptimaliseerd worden door factoren die bandverbreding beinvloeden te
minimaliseren. Bandverbreding wordt beschreven door De van Deemter vergelijking.
De van Deemter vergelijking
