Hoorcollege 3
X-SCID
• Defecte gc-receptor
• Bevindt zich op het X-chromosoom
• Er worden geen lymfocyten gevormd uit de lymfoïde voorloper cellen
o NK-cellen zijn aangedaan, maar niet helemaal afwezig
o T-cellen zijn wel erg aangedaan
o Er zijn wel B-cellen maar ze hebben geen immuunfunctie
gc-receptor
• De g-chain is een subunit van veel receptoren, o.a. van de TCR
o Is ook aanwezig in cytokine receptoren van IL-2, IL-4, IL-7, IL-9 en IL-15
• Heeft invloed op:
o Celproliferatie
o Herkenning van MHC
o Signalering
• Afwezigheid van de g-chain zorgt voor:
• gc-gen bestaat uit 369 aminozuren, er zijn verschillende mutaties
zoals:
o Arg289 ® stop codon
o Deletie van exon 4 of 6
o Tyr219 ® stop codon
o Gln285 ® Ala
CD3 ® T-cel precursor
CD4 ® T-helper cellen, monocyten en macrofagen
CD8 ® Cytotoxische T-cellen
CD34 ® Hematopoetishce stamcellen, beenmerg
Ex vivo gene therapy
1. Isoleer beenmerg
2. Behandel met chemotherapie of bestraling
3. Selecteer CD34+ cellen detecteren met FACS
• FACS ® labelen met antilichaam dat bindt aan bv. CD34+, het antilichaam is gebonden aan
een fluorescente groep en de cellen waaraan het antilichaam gebonden kunnen geselecteerd
worden
4. Maak celculturen van CD34+ cellen
5. Transfecteer de CD34+ cellen met een retrovirus met gc-gen
6. Maak weer culturen en selecteer CD34+/gc+/Neo+ cellen
• Alle niet getransfecteerde cellen zullen doodgaan neomycide en alle wel getransfecteerde
cellen overleden en kunnen geselecteerd worden
7. Infuseer de getransfecteerde cellen weer en ze gaan vanzelf terug naar het beenmerg
Uitkomsten SCID-behandeling
• T-cellen en NK-cellen stijgen na gene transfer, B-cellen niet per se
o Maar die waren ook niet echt aangedaan
• NK-cellen fluctueren wel sterk, maar vlakken na een tijdje af
• Normale thymus grootte
• Memory T-cellen zijn op het normale niveau
X-SCID
• Defecte gc-receptor
• Bevindt zich op het X-chromosoom
• Er worden geen lymfocyten gevormd uit de lymfoïde voorloper cellen
o NK-cellen zijn aangedaan, maar niet helemaal afwezig
o T-cellen zijn wel erg aangedaan
o Er zijn wel B-cellen maar ze hebben geen immuunfunctie
gc-receptor
• De g-chain is een subunit van veel receptoren, o.a. van de TCR
o Is ook aanwezig in cytokine receptoren van IL-2, IL-4, IL-7, IL-9 en IL-15
• Heeft invloed op:
o Celproliferatie
o Herkenning van MHC
o Signalering
• Afwezigheid van de g-chain zorgt voor:
• gc-gen bestaat uit 369 aminozuren, er zijn verschillende mutaties
zoals:
o Arg289 ® stop codon
o Deletie van exon 4 of 6
o Tyr219 ® stop codon
o Gln285 ® Ala
CD3 ® T-cel precursor
CD4 ® T-helper cellen, monocyten en macrofagen
CD8 ® Cytotoxische T-cellen
CD34 ® Hematopoetishce stamcellen, beenmerg
Ex vivo gene therapy
1. Isoleer beenmerg
2. Behandel met chemotherapie of bestraling
3. Selecteer CD34+ cellen detecteren met FACS
• FACS ® labelen met antilichaam dat bindt aan bv. CD34+, het antilichaam is gebonden aan
een fluorescente groep en de cellen waaraan het antilichaam gebonden kunnen geselecteerd
worden
4. Maak celculturen van CD34+ cellen
5. Transfecteer de CD34+ cellen met een retrovirus met gc-gen
6. Maak weer culturen en selecteer CD34+/gc+/Neo+ cellen
• Alle niet getransfecteerde cellen zullen doodgaan neomycide en alle wel getransfecteerde
cellen overleden en kunnen geselecteerd worden
7. Infuseer de getransfecteerde cellen weer en ze gaan vanzelf terug naar het beenmerg
Uitkomsten SCID-behandeling
• T-cellen en NK-cellen stijgen na gene transfer, B-cellen niet per se
o Maar die waren ook niet echt aangedaan
• NK-cellen fluctueren wel sterk, maar vlakken na een tijdje af
• Normale thymus grootte
• Memory T-cellen zijn op het normale niveau
