LabTools
2019-2020
Hogeschool Utrecht
Inhoudsopgave
Table of Contents
Inhoudsopgave.......................................................................................................................................1
Thema 1 Basisbegrippen voor scheidingsmethoden en Gelfiltratie.......................................................2
Chromatografie..................................................................................................................................2
Gelfiltratie.........................................................................................................................................11
Thema 2 Affiniteitschromatografie en scheiding op basis van polariteit..............................................14
Eiwitten.............................................................................................................................................14
Scheiding op basis van biologische affiniteit.....................................................................................20
Scheiding op basis van polariteit en oplosbaarheid..........................................................................27
Thema 3 elektroforese.........................................................................................................................30
Elektroforese....................................................................................................................................30
Type elektroforese............................................................................................................................35
Thema 4 ionwisselingschromatografie.................................................................................................48
Ionenwisselingschromatografie........................................................................................................48
Thema 5 Lichtmicroscopie....................................................................................................................65
Lenzen..............................................................................................................................................65
Het oog.............................................................................................................................................69
Lensen in microscopen.....................................................................................................................70
Optische beeldfouten.......................................................................................................................77
Thema 6 Overige microscopische technieken......................................................................................78
Beperkingen lichtmicroscoop...........................................................................................................78
Transmission.....................................................................................................................................89
Scanning.......................................................................................................................................90
Thema 7 fluorscentie............................................................................................................................91
Fluorescentie....................................................................................................................................91
Fluorometer......................................................................................................................................96
Fluorescentie-microscopie................................................................................................................96
Confocale microscoop......................................................................................................................98
Thema 8 centrifugeren.......................................................................................................................104
, Centrifugeren theorie.....................................................................................................................104
Bezinksnelheid en wrijving.........................................................................................................104
Centripetaal kracht.....................................................................................................................106
Omrekenen RCF en RPM.............................................................................................................107
Centrifugeren in de praktijk............................................................................................................112
Bouw centrifuge en tareren........................................................................................................112
Centrifugatietechnieken.............................................................................................................113
Typen centrifuges en rotors........................................................................................................115
Thema 9 massaspectrometrie............................................................................................................116
Principe massa spectrometrie........................................................................................................116
Typen massa spectrometers...........................................................................................................126
Tandem-MS (MS/MS).....................................................................................................................130
Ionisatietechnieken........................................................................................................................131
Voorscheiding (GC-MS, LC-MS).......................................................................................................132
Thema 10............................................................................................................................................134
Oplossingen maken vanuit:............................................................................................................134
Stock oplossingen.......................................................................................................................134
Vaste stof....................................................................................................................................134
Verdunningsreeksen maken...........................................................................................................134
Afronding........................................................................................................................................135
Thema 11 Flow cytometrie.................................................................................................................136
Bijlage.............................................................................................................................................147
Formule blad...............................................................................................................................147
Opdrachten Labtools per thema.....................................................................................................149
Proeftentamen Labtools.................................................................................................................219
Proeftoets antwoorden..................................................................................................................230
Thema 1 Basisbegrippen voor scheidingsmethoden en
Gelfiltratie
Chromatografie
Kolom chromatografie:
,Verdeling van componenten over 2 fasen (die niet mengbaar zijn)
stationaire fase (vast of vlb.) (column op de afb.)
op het chromatografisch bed
(bijvoorbeeld, glazen kolom)
mobiele fase (vlb. of gas)
wordt via ‘delivery system’ opgebracht
Als stationaire fase vast is, dan mobiele fase vloeibaar
Als stationaire fase vloeibaar is, dan is mobiele fase een gas
Stoffen die we van elkaar willen scheiden, lopen niet met dezelfde snelheid over de kolom. Daar
maken we gebruik van. We moeten wel met enige kennis van de stoffen die we willen zuiveren een
goed materiaal kiezen voor onze kolom.
Stoffen met een hoge affiniteit voor de stationaire fase komen vertraagd van de kolom
Het basisprincipe van chromatografie
Een scheidingstechniek waarmee een mengsel van stoffen gescheiden kan worden in individuele
componenten
De groene stof wordt door de kolom meer vertraagd dan de rode stof.
Dit is afhankelijk van de interactie tussen de stof en de kolom.
, - Preparatief(dat je weet dat je verschillende stoffen in je oplossing hebt) = je wilt iets
prepareren, bijvoorbeeld je weet dat er insuline in zit, tussen de bacteriële meuk
- Analytisch(als je weet dat je verschillende stoffen hebt maar niet welke en met welke
concentratie) is, als je erachter wilt komen wat er in de stof zit. Is soms wat lastiger
omdat je niet weet wat er allemaal in je mengsel zit.
De verschillende vormen van chromatografische systemen:
Typen chromatografische systemen
o Dunne laag chromatografie
o Kolom chromatografie
Dunne laag chromatofgrafie:
De mobiele fase trekt vanaf de bodem door de stationaire fase en neemt de stoffen mee die
gescheiden moeten worden.
Deze lopen elk tot een bepaald punt, afhankelijk van de aard van de stof.
Stationaire fase:
dunne laag absorberend materiaal zoals bijvoorbeeld silica gel.
Mobiele fase:
beweegt over de stationaire fase door capillaire werking.
Detectie:
aankleuren / UV /radioactief
De Rf en Rx waardes bij een dunne laag chromatogram.
Rf=loopafstand van de oplosmiddel (te onderzoekenstof)
Rx= loopafstand van de referentie
2019-2020
Hogeschool Utrecht
Inhoudsopgave
Table of Contents
Inhoudsopgave.......................................................................................................................................1
Thema 1 Basisbegrippen voor scheidingsmethoden en Gelfiltratie.......................................................2
Chromatografie..................................................................................................................................2
Gelfiltratie.........................................................................................................................................11
Thema 2 Affiniteitschromatografie en scheiding op basis van polariteit..............................................14
Eiwitten.............................................................................................................................................14
Scheiding op basis van biologische affiniteit.....................................................................................20
Scheiding op basis van polariteit en oplosbaarheid..........................................................................27
Thema 3 elektroforese.........................................................................................................................30
Elektroforese....................................................................................................................................30
Type elektroforese............................................................................................................................35
Thema 4 ionwisselingschromatografie.................................................................................................48
Ionenwisselingschromatografie........................................................................................................48
Thema 5 Lichtmicroscopie....................................................................................................................65
Lenzen..............................................................................................................................................65
Het oog.............................................................................................................................................69
Lensen in microscopen.....................................................................................................................70
Optische beeldfouten.......................................................................................................................77
Thema 6 Overige microscopische technieken......................................................................................78
Beperkingen lichtmicroscoop...........................................................................................................78
Transmission.....................................................................................................................................89
Scanning.......................................................................................................................................90
Thema 7 fluorscentie............................................................................................................................91
Fluorescentie....................................................................................................................................91
Fluorometer......................................................................................................................................96
Fluorescentie-microscopie................................................................................................................96
Confocale microscoop......................................................................................................................98
Thema 8 centrifugeren.......................................................................................................................104
, Centrifugeren theorie.....................................................................................................................104
Bezinksnelheid en wrijving.........................................................................................................104
Centripetaal kracht.....................................................................................................................106
Omrekenen RCF en RPM.............................................................................................................107
Centrifugeren in de praktijk............................................................................................................112
Bouw centrifuge en tareren........................................................................................................112
Centrifugatietechnieken.............................................................................................................113
Typen centrifuges en rotors........................................................................................................115
Thema 9 massaspectrometrie............................................................................................................116
Principe massa spectrometrie........................................................................................................116
Typen massa spectrometers...........................................................................................................126
Tandem-MS (MS/MS).....................................................................................................................130
Ionisatietechnieken........................................................................................................................131
Voorscheiding (GC-MS, LC-MS).......................................................................................................132
Thema 10............................................................................................................................................134
Oplossingen maken vanuit:............................................................................................................134
Stock oplossingen.......................................................................................................................134
Vaste stof....................................................................................................................................134
Verdunningsreeksen maken...........................................................................................................134
Afronding........................................................................................................................................135
Thema 11 Flow cytometrie.................................................................................................................136
Bijlage.............................................................................................................................................147
Formule blad...............................................................................................................................147
Opdrachten Labtools per thema.....................................................................................................149
Proeftentamen Labtools.................................................................................................................219
Proeftoets antwoorden..................................................................................................................230
Thema 1 Basisbegrippen voor scheidingsmethoden en
Gelfiltratie
Chromatografie
Kolom chromatografie:
,Verdeling van componenten over 2 fasen (die niet mengbaar zijn)
stationaire fase (vast of vlb.) (column op de afb.)
op het chromatografisch bed
(bijvoorbeeld, glazen kolom)
mobiele fase (vlb. of gas)
wordt via ‘delivery system’ opgebracht
Als stationaire fase vast is, dan mobiele fase vloeibaar
Als stationaire fase vloeibaar is, dan is mobiele fase een gas
Stoffen die we van elkaar willen scheiden, lopen niet met dezelfde snelheid over de kolom. Daar
maken we gebruik van. We moeten wel met enige kennis van de stoffen die we willen zuiveren een
goed materiaal kiezen voor onze kolom.
Stoffen met een hoge affiniteit voor de stationaire fase komen vertraagd van de kolom
Het basisprincipe van chromatografie
Een scheidingstechniek waarmee een mengsel van stoffen gescheiden kan worden in individuele
componenten
De groene stof wordt door de kolom meer vertraagd dan de rode stof.
Dit is afhankelijk van de interactie tussen de stof en de kolom.
, - Preparatief(dat je weet dat je verschillende stoffen in je oplossing hebt) = je wilt iets
prepareren, bijvoorbeeld je weet dat er insuline in zit, tussen de bacteriële meuk
- Analytisch(als je weet dat je verschillende stoffen hebt maar niet welke en met welke
concentratie) is, als je erachter wilt komen wat er in de stof zit. Is soms wat lastiger
omdat je niet weet wat er allemaal in je mengsel zit.
De verschillende vormen van chromatografische systemen:
Typen chromatografische systemen
o Dunne laag chromatografie
o Kolom chromatografie
Dunne laag chromatofgrafie:
De mobiele fase trekt vanaf de bodem door de stationaire fase en neemt de stoffen mee die
gescheiden moeten worden.
Deze lopen elk tot een bepaald punt, afhankelijk van de aard van de stof.
Stationaire fase:
dunne laag absorberend materiaal zoals bijvoorbeeld silica gel.
Mobiele fase:
beweegt over de stationaire fase door capillaire werking.
Detectie:
aankleuren / UV /radioactief
De Rf en Rx waardes bij een dunne laag chromatogram.
Rf=loopafstand van de oplosmiddel (te onderzoekenstof)
Rx= loopafstand van de referentie
