Microscopy and image analysis: hoor- en werkcolleges
HC1: Light and optics
Compound microscoop (meerdere lenzen): 50x
Simpele microscoop (enkele lens): 275x, van Leeuwenhoek
Cajal
-golgi staining voor kleuren zenuwcellen
-verbindingen synapsen ontdekt
-zichtbaar maken in transparante weefsels
H&E staining: medische diagnose
-karakteriseren weefsel
-hematoxylin voor kernen, eosine voor eiwitten
-geen kleuring vs DIC en fase contrast staining (gepolariseerd licht)
Elektronenmicroscopie
-moeilijk om te herkennen wat er gebeurd
Fluorescentie microscopie
-GFP expressie belangrijke stap
Compacte fluorescentie microscoop
,-twee lampen:
-transmitted light microscopy: licht door sample, gefocust door condenser en
opgevangen door objectief (brightfield/fase contrast)
-Epi-fluorescentie microscopie of epi-illuminatie: lichtbron en imagine door dezelfde
objectief (vaak gebruikt)
-widefield: hele sample verlicht door licht (brightfield, fasecontrast, widefield fluorescentie)
-confocal: laser scanning microscoop (ook widefield)
Microscoop configuratie
-inverted gaat fluorescentie van onder de sample
-inverted gebruik je bij levend materiaal
-cellen met medium erop zodat ze blijven leven
,Groottes: cel, nucleus/mitochondriën, eiwit, atoom
Resolutie = kleinste afstand waarbij twee objecten onderscheiden kunnen worden
-hoge resolutie kun je goed mee onderscheiden = kleinere afstand (resolutie = 1/d)
-gewone lichtmicroscoop kan ongeveer de helft resolutie van golflengte halen waarmee je kijkt!
-EM: context -> alles wat er omheen gebeurd ook weergeven
Licht: elektromagnetische radiatie
-kleur komt overeen met golflengte, zichtbaar 400-700nm
-magnetisch en elektrisch veld loodrecht op elkaar
-golf (interferentie) en deeltjes eigenschappen (energiepakketjes)
-hoe kleiner de golflengte, hoe schadelijker
, Licht als golf: interferentie
-versterken of uitdoven
Licht als deeltje: fluorescentie
-GFP eiwit heeft foton bepaalde golflengte nodig om fluorescentie te geven
Kwaliteit licht
-polychromatisch kan wit licht zijn
-polarisatie als licht allemaal dezelfde kant op staat (ook na weerkaatsing)
-noncoherent: uit fase, minder versterking
-laser heeft eigenschappen bovenste rijtje: monochromatic, polarized en coherent
Formules:
HC1: Light and optics
Compound microscoop (meerdere lenzen): 50x
Simpele microscoop (enkele lens): 275x, van Leeuwenhoek
Cajal
-golgi staining voor kleuren zenuwcellen
-verbindingen synapsen ontdekt
-zichtbaar maken in transparante weefsels
H&E staining: medische diagnose
-karakteriseren weefsel
-hematoxylin voor kernen, eosine voor eiwitten
-geen kleuring vs DIC en fase contrast staining (gepolariseerd licht)
Elektronenmicroscopie
-moeilijk om te herkennen wat er gebeurd
Fluorescentie microscopie
-GFP expressie belangrijke stap
Compacte fluorescentie microscoop
,-twee lampen:
-transmitted light microscopy: licht door sample, gefocust door condenser en
opgevangen door objectief (brightfield/fase contrast)
-Epi-fluorescentie microscopie of epi-illuminatie: lichtbron en imagine door dezelfde
objectief (vaak gebruikt)
-widefield: hele sample verlicht door licht (brightfield, fasecontrast, widefield fluorescentie)
-confocal: laser scanning microscoop (ook widefield)
Microscoop configuratie
-inverted gaat fluorescentie van onder de sample
-inverted gebruik je bij levend materiaal
-cellen met medium erop zodat ze blijven leven
,Groottes: cel, nucleus/mitochondriën, eiwit, atoom
Resolutie = kleinste afstand waarbij twee objecten onderscheiden kunnen worden
-hoge resolutie kun je goed mee onderscheiden = kleinere afstand (resolutie = 1/d)
-gewone lichtmicroscoop kan ongeveer de helft resolutie van golflengte halen waarmee je kijkt!
-EM: context -> alles wat er omheen gebeurd ook weergeven
Licht: elektromagnetische radiatie
-kleur komt overeen met golflengte, zichtbaar 400-700nm
-magnetisch en elektrisch veld loodrecht op elkaar
-golf (interferentie) en deeltjes eigenschappen (energiepakketjes)
-hoe kleiner de golflengte, hoe schadelijker
, Licht als golf: interferentie
-versterken of uitdoven
Licht als deeltje: fluorescentie
-GFP eiwit heeft foton bepaalde golflengte nodig om fluorescentie te geven
Kwaliteit licht
-polychromatisch kan wit licht zijn
-polarisatie als licht allemaal dezelfde kant op staat (ook na weerkaatsing)
-noncoherent: uit fase, minder versterking
-laser heeft eigenschappen bovenste rijtje: monochromatic, polarized en coherent
Formules:
