HOOFDSTUK 19: DNA TECHNOLOGY
Concept 19.1
DNA sequencing
Sequentie DNA bepalen
● Sanger sequencing
● Next generation sequencing (NGS)
○ Verschillende varianten met zelfde principe
Verschillende soorten:
1. NGS
2. Gen klonering
3. DNA gel elektroforese
4. PCR
1
,1. NGS
2
, 2. Gen klonering
Toepassingen:
● Produceren gen (DNA)
● Productie gen-product (eiwit)
Hoe knip je een gen uit DNA en plak je het in het plasmide?
Restrictie enzymen: eiwitten die in DNA knippen op een specifieke sequentie
● Palindroom sequentie (sites)
●
● Sticky ends
○ 5’ overhang
■ 5’ … G 3’
■ 3’ … CTTAA 5’
○ 3’ overhang
■ 5’ … GTTAA 3’
■ 3’ … C 5’
● Blunt ends
○ 5’ … GTT TTC … 3’
○ 3’ … CTT AAG … 5’
3
Concept 19.1
DNA sequencing
Sequentie DNA bepalen
● Sanger sequencing
● Next generation sequencing (NGS)
○ Verschillende varianten met zelfde principe
Verschillende soorten:
1. NGS
2. Gen klonering
3. DNA gel elektroforese
4. PCR
1
,1. NGS
2
, 2. Gen klonering
Toepassingen:
● Produceren gen (DNA)
● Productie gen-product (eiwit)
Hoe knip je een gen uit DNA en plak je het in het plasmide?
Restrictie enzymen: eiwitten die in DNA knippen op een specifieke sequentie
● Palindroom sequentie (sites)
●
● Sticky ends
○ 5’ overhang
■ 5’ … G 3’
■ 3’ … CTTAA 5’
○ 3’ overhang
■ 5’ … GTTAA 3’
■ 3’ … C 5’
● Blunt ends
○ 5’ … GTT TTC … 3’
○ 3’ … CTT AAG … 5’
3
